山东半岛地区不同来源的禽Ⅰ型副粘病毒毒力差异比较研究

来源 :山东师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cdelphi
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本论文对山东半岛地区的4株禽Ⅰ型副粘病毒强毒株进行了分离,对其血清学、临床毒力表现和分子生物学方面进行了研究。 将4株地方强毒株经绒毛尿囊腔接种10日龄鸡胚,鸡胚接种后36—72h鸡胚全身出血,含病毒的尿囊液红细胞凝集效价(HA)为1:160-1:640,并且能被ND标准阳性血清所抑制,不能被AI标准阳性血清所抑制。人工发病实验结果表明3株鸡源禽Ⅰ型副粘病毒属于强毒株,鸽源禽Ⅰ型副粘病毒对鸡不发病,对鸽则表现为强毒株。 为了探讨山东半岛地区NDV毒力分布情况,将分离获得的其中3株NDV的鸡胚平均致死时间(Mean death time,MDT)、1日龄雏鸡脑内致病指数(Intracerebral pathogenicity index,ICPI)和6周龄鸡静脉内致病指数(Intravenous pathogenicity index,IVPI)进行测定。NDV—PL(蓬莱)株、NDV—ZY(招远)株、NDV—LZ(莱州)株的MDT分别为63.23、60、61.5,ICPI分别为0.9、1.83、1.5,IVPI分别为2.35、2.74、2.61,结果表明3株NDV中,NDV—LZ株的各项指标均为强毒力病毒,NDV—ZY株和NDV—PL株除ICPI结果显示为中等毒力病毒外,其余结果均显示为强毒力病毒,表明这3株新城疫病毒毒株对鸡有较强的致病力。 利用自己设计的引物和参考已发表的引物,通过一步法RT—PCR扩增出三个毒株的479bp的片段和两个毒株的497bp的片段,这两个目的片段含有F蛋白的酶切裂解位点。将目的片段在72℃加腺苷酸尾后,克隆至pGEM—T Easy载体中,构建了相应的重组质粒,经酶切与PCR鉴定后,送交测序并贮存基因。4株cDNA测序结果表明,各毒株的酶切裂解位点都符合强毒株的酶切裂解位点的序列,表明我们所分离的毒株都属于强毒株。 针对F基因479bp和497bp片段,通过DNASIS软件构建了相应的系统发育树,系统发育分析表明山东半岛地区禽Ⅰ型副粘病毒与欧美及中东地区基因群明显分离,但鸽瘟病毒与东北地区禽Ⅰ型副粘病毒的同源性很高。
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