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实验目的：初步研究小鼠源性抗CD52单克隆抗体HI186的生物学功能。利用现有小鼠杂交瘤制备HI186单链抗体(ScFv)，结合其生物学功能的研究，为日后应用于临床治疗打下基础。实验方法：1．应用胎盼蓝染色计数活细胞、MTT法检测活细胞和Annexin V染色特异性检测凋亡细胞等方法研究不同克隆株的抗CD52单克隆抗体对部分白血病细胞系的作用，比较其生物学功能和作用的异同。2．RT-PCR的方法克隆小鼠杂交瘤HI186的抗体基因轻、重链可变区基因，利用overlap-PCR方法构建HI186-ScFv融合基因，定向克隆入原核表达载体pET22b，构建重组质粒pET22b／HI186-ScFv。将重组质粒转染入BL2 1感受态菌株。在IPTG存在条件下，诱导表达HI186单链抗体。所得融合蛋白经复性、纯化后，通过流式细胞术检测其与天然细胞膜CD52蛋白的结合活性和特异性；Western blot印证其与变性线形蛋白结合活性。实验结果：1．HI186单克隆抗体对于CEM、LCL-H、HPB-ALL、REH等CD52阳性白血病细胞系在体外具有一定的生长抑制和促凋亡作用。2．扩增HI186重链可变区基因342bp，m186轻链可变区基因339bp。3．overlap-PCR构建包含linker的HI186ScFv单链抗体融合基因，全长为759bp，经酶切转入pET22b质粒，构建pET22b／HI186-ScFv，在IPTG存在下可诱导高表达HI186-ScFv单链抗体融合蛋白。4．抗体免疫竞争实验表明HI186-ScFv单链抗体与原鼠源性HI186单克隆抗体具有相同的结合表位，可以抑制HI186单克隆抗体与细胞膜表面CD52天然抗原的结合，同时也可以结合变性的具有良好的结合活性和特异性。实验结论：HI186单克隆抗体生物学实验表明对相应的白血病细胞系具有抑制生长作用，并且具有诱导凋亡作用。在成功构建了HI186-ScFv单链抗体的基础上，应进一步研究其应用的可能性，并据此对其进行继续改造。