背景:多重耐药（multidrug-resistant,MDR）革兰阴性菌引起的感染越来越难以用现有的抗菌药物治疗。粘菌素通常作为最后一线药物来治疗这些感染。但是随着耐药质粒mcr-1的发现以及粘菌素在临床上应用的增多,近年来,粘菌素耐药（colistin-resistant,Col-R）革兰阴性菌呈稳步上升趋势。由于几乎没有新的抗菌药物被引入市场,这就突出了有效的联合治疗的必要性。一个很有希望的策略是利用粘菌素与非抗菌药物的潜在协同作用来恢复粘菌素的治疗效果。本研究旨在探讨粘菌素联合抗类风湿关节炎药物金诺芬对Col-R革兰阴性菌的体外、体内抗菌活性及作用机制。方法:（1）采用微量肉汤稀释法测定临床分离的66株Col-R革兰阴性菌对9种抗菌药物的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）,采用PCR检测这些菌株携带mcr-1、mcr-8的情况。采用棋盘法联合药敏测定粘菌素联合金诺芬对66 株 Col-R 革兰阴性菌的联合抑菌指数（fractional inhibitory concentration index,FICI）。（2）采用时间-杀菌曲线进一步评价粘菌素联合金诺芬对8株挑选的Col-R菌株的抗菌作用。用亚抑菌浓度的粘菌素单药或联合金诺芬连续传代培养Col-R菌株,并检测这些菌株的粘菌素MIC,评价联合用药是否能抑制粘菌素耐药性的进展。采用扫描电镜、透射电镜观察粘菌素与金诺芬联合对Col-R菌株形态的影响。（3）建立小鼠腹腔感染模型,评价粘菌素、金诺芬单药及联合用药情况下小鼠的存活率,观察腹水和脾组织中的细菌载量,记录腹水的炎症因子、炎症细胞,光学显微镜观察小鼠腹水瑞氏吉姆萨染色。（4）采用广泛靶向代谢组学探讨粘菌素联合金诺芬对Col-R肺炎克雷伯杆菌的协同作用机制。结果:（1）66株Col-R革兰阴性菌中有68.18%（45/66）是MDR菌株,mcr-1阳性菌株12株,mcr-8阳性菌株5株。（2）棋盘法结果显示粘菌素联合金诺芬对92.86%的Col-R肺炎克雷伯杆菌、81.25%的Col-R大肠杆菌、100%的Col-R阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌有协同作用。时间-杀菌曲线显示粘菌素联合金诺芬对8株Col-R菌株都有协同作用,但是大肠杆菌08-85与铜绿假单胞菌26587在24 h后出现了再生。连续传代培养实验显示,联合用药比粘菌素单药能显著抑制粘菌素MIC的升高。电镜显示,相比粘菌素、金诺芬单药,两药联用显著破坏了肺炎克雷伯杆菌18605的外膜,而鲍曼不动杆菌13660在联合治疗后的细胞长度明显短于单药治疗。（3）小鼠腹腔感染中,粘菌素联合金诺芬治疗显著改善了小鼠的存活率,与单药组相比,联合用药显著降低了腹水和脾组织的细菌载量、腹水炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）及腹水中性粒细胞数量,腹水瑞氏吉姆萨染色显示联合用药组炎症表现较单药组明显改善。（4）代谢组分析显示,在15 min、1h,粘菌素单药及联合用药显著降低了细胞膜脂肪酸和磷脂水平。一种与脂多糖、肽聚糖合成有关的氨基糖,即尿苷二磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖在联合用药下水平显著降低。此外,该组合显著抑制了糖酵解、三羧酸循环、氨基酸、肽和核苷酸的代谢。结论:（1）66株Col-R菌株MDR占较高比例,部分Col-R菌株为mcr-1或mcr-8基因阳性菌株。（2）粘菌素与金诺芬联合使用在体外实验中显示出协同作用,并可抑制粘菌素耐药性的进展。（3）粘菌素联合金诺芬对小鼠腹腔感染模型有很好的治疗效果。（4）粘菌素联合金诺芬的协同机制首先是由粘菌素驱动细胞膜的破坏,然后由联合用药驱动的多个关键代谢途径的抑制引起的。