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冬虫夏草是名贵中药,主要生长在我国青海,现已证明它具有多种药效价值。但由于其生长条件苛刻,目前产量较低。依据原生质体制备的要求,本实验用正交法探索了菌龄、渗透压稳定剂、酶液组成和作用时间对虫草菌原生质体制备的影响,筛选出用浓度均为1%的溶菌酶和纤维素酶混合液,以甘露醇为渗透压稳定剂,对菌龄为4天的虫草菌作用3小时效果最佳。将最佳条件下制备的原生质体分别进行紫外和NTG诱变剂诱变,以期得到高产菌株。紫外诱变分别选择了10s、15s、20s、25s和30s五个时间下进行诱变,结果表明25s为最佳诱变时间。选择不同浓度,作用时间的NTG进行诱变,再将各条件下制备的诱变体提取甘露醇,用比色法测量甘露醇含量,以此为标准筛选出最佳菌种。最终得以0.2mg/mlNTG作用15min所得菌种甘露醇含量最高,为33.9%。将甘露醇含量较高的突变株经传代培养,甘露醇含量稳定。以青海产天然冬虫夏草为标准实验材料,对紫外诱变和NTG诱变的菌丝体分别进行有效成分的测定——虫草素、虫草酸、虫草多糖及氨基酸含量。检测结果表明,在相同的条件下:1、天然冬虫夏草的虫草素含量为0.038%,紫外诱变后含虫草素为0.053%,NTG诱变后含虫草酸为0.068%;2、天然冬虫夏草的虫草酸含量为6.35%,紫外诱变后含虫草酸5.97%,NTG诱变后含虫草酸6.81%;3、紫外诱变虫草菌丝体(8.41%)和NTG诱变虫草菌丝体(9.08%)与天然冬虫夏草(8.92%)中多糖含量基本相近;天然冬虫夏草的氨基酸总含量为259.87mg/g,紫外诱变后氨基酸总含量为232.96mg/g,NTG诱变后氨基酸总含量为257.67mg/g。 <WP=61>以上结果表明,人工诱变所得虫草菌丝体虫草素、虫草酸、虫草多糖均高于天然冬虫夏草,氨基酸含量与天然虫草含量相当。而且NTG诱变所得虫草菌丝体虫草素、虫草酸、虫草多糖和氨基酸含量又高于紫外诱变所得虫草菌丝体,由此证明NTG诱变的虫草,缩短了虫草的生长周期,降低生产成本,而且可以作为天然虫草的替代品入药应用。