嘌呤P2X7受体遗传变异在原发性骨质疏松症发生中的作用及机制

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hezeliu
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研究背景和目的:原发性骨质疏松症(OP)是以骨质减少、骨的显微结构退化为特征,致使骨脆性增加而易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。P2X7受体(P2X7)是ATP门控的阳离子通道,具有广泛的生物学效应,在包括成骨细胞和破骨细胞在内的多种细胞中均有表达,在骨形成和骨吸收过程中都发挥重要的作用。遗传因素被认为是OP发病的重要决定因素。近来P2X7基因功能性单核苷酸多态性(SNP)与骨质疏松症患病风险的相关性研究备受关注。白种人中的研究提示P2X7基因功能性遗传多态性与OP易感性相关,但基因多态性在种类和频率方面都存在显著的种族差异,因此有必要在中国人群中开展P2X7遗传多态性与骨质疏松症易感性的研究。此项研究的目的是在中国人群中进行OP遗传流行病学调查,明确P2X7基因功能性SNP与OP的遗传关联性,探讨P2X7基因功能性SNP在OP发病中的作用及可能的机制,为更好地预防及治疗OP提供依据。方法:1、采用病例-对照的研究方法,收集400例OP患者及400例正常对照绝经后女性临床资料和血样。限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应(PCR-RFLP)和等位特异性 PCR 技术检测 P2X7 Rs3751143(Glu496Ala)、Rs2230911(Thr357Ser)、Rs1718119(Ala348Thr)、Rs2393799(-762 T0.03)。携带单体型 CGG 个体 OP 易感性增高(OR=3.762,95%CI:1.21-11.68,p=0.014)。4、与P2X7 Rs3751143-AA个体相比,纯合突变P2X7 Rs3751143-CC个体成骨细胞P2X7 mRNA(p<0.01)表达明显降低、ATP诱导的[Ca2+]i显著下降(p<0.01)、ALP(p<0.05)、OCN(p<0.05)和 Collagen I(p<0.01)mRNA 表达下调、成骨细胞上清液中ALP表达水平下降(p<0.01);过表达P2X7-pEGFP-C1质粒,可提高 P2X7 Rs3751143-CC 个体 P2X7 mRNA(p<0.01)表达、增加 ATP 诱导的[Ca2+]i(p<0.01)、上调 ALP(p<0.05)、OCN(p<0.05)和 Collagen I(p<0.01)mRNA表达、升高成骨细胞上清液中ALP表达水平(p<0.01)。5、与 P2X7 Rs3751143-AA 个体相比,纯合突变 P2X7 Rs3751143-CC 个体破骨细胞P2X7(p<0.01)mRNA表达明显降低、破骨细胞ATP诱导的[Ca2+]i显著下降(p<0.01)、破骨细胞ATP诱导的P2X7膜孔形成能力下降(p<0.01)、破骨细胞上清液中caspase 1(p<0.05)和LDH(p<0.05)表达水平下降,而上清液中TRAP分泌增加(p<0.01);过表达P2X7-pEGFP-C1质粒,可提高P2X7 Rs3751143-CC个体破骨细胞P2X7(p<0.01)mRNA表达、增加破骨细胞ATP诱导的[Ca2+]i(p<0.01)、增强破骨细胞ATP诱导P2X7膜孔形成能力(p<0.05)、提高破骨细胞上清液中caspase 1(p<0.05)和LDH(p<0.05)表达水平,而降低上清液中TRAP分泌(p<0.01)。6、与P2X7 Rs3751143-AA个体相比,无论是在正常对照组还是在OP组中P2X7 Rs3751143-CC突变个体血清中钙浓度下降(p<0.05)、ALP分泌减少(p<0.05)和 TRAP 分泌增多(p<0.01)。结论:1、病例-对照研究提示P2X7 Rs3751143 A
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