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胰腺癌由于早期转移、高侵袭性及缺少有效的治疗措施,是一个高死亡率和短暂生存期的疾病。完全的肿瘤外科切除仍然是主要的有效治疗措施,化疗药物对这一进展期疾病效果有限。当前研究致力于阐明胰腺癌的发病机理,探索早期诊断方法,寻找有治疗价值的药物靶点等。B7-H1(CD274,PD-L1)是在1999年首先发现,属于B7共刺激分子家族中的一种细胞表面糖蛋白。许多研究已经发现B7-H1在人类各系统肿瘤中广泛分布,并与不良预后和肿瘤恶性程度紧密相关。B7-H1蛋白的主要功能是参与肿瘤细胞对肿瘤抗原特异性T淋巴细胞的免疫逃逸过程,它可以与T细胞上的PD-1受体或其它受体结合从而诱导T细胞失活或凋亡、抑制T细胞增殖、抑制细胞因子如IL-2等的释放,从而使肿瘤细胞免于受到T淋巴细胞的攻击而得以存活。B7-H1在很多肿瘤组织中高表达,并与临床分期病理分型相关。此外近年来的研究发现B7-H1分子不但介导对肿瘤细胞的免疫逃逸反应,而且在肿瘤中的异常表达会直接影响肿瘤细胞的生物学活性。本课题拟重点研究B7-H1在胰腺癌发生发展中的作用机制,探讨B7-H1是否直接影响胰腺癌细胞的生物学活性,参与胰腺癌细胞上皮间质转化等过程,为临床胰腺癌的分子靶向治疗提供新的靶点。目的检测B7-H1蛋白在胰腺导管腺癌标本中的表达。分别构建B7-H1过表达和RNA干扰的慢病毒载体,研究B7-H1基因表达对人胰腺癌细胞增殖及迁移能力的影响。方法1.应用免疫组化方法(IHC)测定30例胰腺导管腺癌标本中B7-H1蛋白表达情况。2.PCR扩增B7-H1基因的完整开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,设计并合成针对B7-H1基因的RNAi靶向单链片段,通过慢病毒载体包装系统,对以上2种片段进行慢病毒颗粒包装；再用病毒感染不同的胰腺癌细胞株,获得稳定高表达B7-H1蛋白(B7-H1-ORF)和B7-H1表达抑制(B7-Hl-RNAi)的细胞株。3.体外细胞实验：分别检测不同细胞株的生长曲线、细胞周期、克隆形成能力的变化,、Vestern blotting法分析细胞周期相关蛋白及可能的信号分子变化,RT-PCR检测B7-H1过表达细胞株上皮-间充质转代碜关基因变化。→frans well采用SPSS17.0软件单因素方差分析(ANVOA),实验数据用均数±标准差(x±s)表示,两组之间的比较采用配对t检验。计数资料用矛检验及Spearman等级相关分析,P<0.05表示显著差异,有统计学意义。结果1.免疫组化分析显示(62.4+9.1)%的胰腺导管腺癌标本中表达B7-H1蛋白,且主要定位于细胞质。B7-H1蛋白在胰腺导管腺癌标本中表达高于胰腺正常组织。2.成功构建B7-H1-ORF和B7-H1-RNAi慢病毒表达载体,并获得稳定高表达B7-H1的PANC-1细胞株和B7-H1表达抑制的BxPC-3细胞株。3.与对照组细胞相比,B7-H1-ORF转染组细胞增殖速度和克隆形成能力均显著加快,而B7-H1-RNAi转染组的细胞增殖速度和克隆形成能力显著下降；细胞周期检测进一步验证了这一结果。B7-H1-ORF转染组CDK4、CDK6、cyclinD1、 p-Rb、p-JNK表达水平相比对照组有上调,B7-H1-RNAi转染组比对照组则出现下调。4.B7-H1-ORF转染组细胞EMT相关基因检测比对照组无明显差异。结论B7-H1蛋白在胰腺导管腺癌标本中表达高于胰腺正常组织。提示B7-H1可能参与胰腺癌发生发展的病理过程。体外实验中,高表达B7-H1可以促进PANC-1细胞的增殖,而在B7-H1表达较高的BxPC-3细胞中降低B7-H1表达则抑制了细胞增殖。证明了B7-H1在胰腺癌中促进肿瘤发展的作用。并且这种影响可能是通过JNK通路调控的。B7-H1的过表达没有引起胰腺癌细胞出现EMT现象。本研究提示B7-H1的异常表达可能促进胰腺癌实体肿瘤的生长,B7-H1可能成为胰腺癌治疗有效靶点,并为后续优化针对B7-H1的临床试验提供理论基础。