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Forkhead box(Fox)蛋白调控着细胞的分化、增殖、免疫和衰老。大多数与Fox蛋白相关的研究都局限在培养的细胞和啮齿动物中。本实验利用免疫组织化学,免疫荧光,Western-blot,放射免疫测定技术等方法检测猪和大鼠胃肠道是否存在Fox01、Fox03a和Fox04蛋白的表达以及其变化规律。
1.Fox0蛋白在猪胃肠道的定位
本实验对4头杜长大三元杂交成年猪采用常规免疫组化的方法检测猪胃肠道各部位Fox0家族成员的定位。实验就Fox0蛋白在胃底部、幽门部、无腺部、十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠、直肠定位进行了具体分析。结果表明:Fox04存在于胃和肠各部的黏膜层,Fox03a主要存在与各部的固有层和肌层,然而Fox01在胃肠各部都没检测到。本实验的结果提示,猪胃肠道中Fox蛋白的表达有其固定的模式,而Fox04是成年猪胃肠道中分布的主要forkhead转录因子。这些结果提示Fox0蛋白在猪胃肠道组织和细胞中呈特异性表达。
2.猪肠道Fox04依赖年龄性的定位
基于以上实验发现Fox04是成年猪胃肠道主要的forkhead box转录因子,本实验为进一步探测Fox04蛋白随猪发育程度在肠道内的变化规律,将Od(新生),30d(断奶一周),160d(性成熟阶段),180d(成年阶段)杜长大三元杂交母猪作为研究对象,再次通过免疫组织化学研究Fox04蛋白在不同年龄阶段(不同发育阶段)的肠道内的表达情况。
3.大鼠胃肠道Fox04蛋白年龄依赖性的表达
为了验证Fox04蛋白在其他哺乳动物胃肠道内也表现年龄依赖的表达,实验采用了啮齿类动物大鼠为模型进行研究。实验以21d(断奶),2月(性成熟),6月(青年),SD大鼠的十二指肠为研究研究对象,利用免疫组化,免疫荧光以及Western-blot检测不同年龄大鼠胃肠道Fox04的表达。实验结果表明,大鼠十二指肠Fox04蛋白的表达有年龄依赖特异性,定位特异性和组织特异性,为研究Fox04在动物生长发育过程中的表达变化规律以及进一步探讨胃肠道细胞生长和凋亡的机制打下基础。
以上结果表明,Fox04蛋白是成年猪胃肠道内主要表达的forkhead box转录因子;Fox04蛋白作为PI3K/PKB信号通路下游的底物在猪和大鼠的胃肠道上有着不同的表达与机体的发育水平,代谢情况有着密切的联系。