背景子宫内膜异位症（Endometriosis，EMs）是一种妇科常见病，在育龄妇女中发病率高达10％-20％，且呈逐年上升趋势。病因及发病机制尚未明确。虽然是良性疾病，却具有增生、浸润、转移、复发等恶性行为；虽可以侵犯全身任何部位，但以卵巢和宫骶韧带最为常见。EMs常引起盆腔疼痛、痛经及不孕等症状，严重影响妇女生活质量。EMs目前按其组织发生学、临床表现以及处理的不同分为腹膜型、卵巢型及深部浸润型3种类型。但无论那一种类型的盆腔EMs患者常同时合并不同程度的深部浸润型子宫内膜异位症（Deep Infiltrating Endometriosis，DIE）。DIE是Ebts的一种特殊类型，该型病灶主要分布于子宫直肠陷凹（Douglas窝）、子宫骶骨韧带、直肠阴道隔等部位，是引起EMs疼痛（包括痛经、性交痛、经期排便疼痛和非周期性慢性盆腔疼痛）主要症状的基本根源。目前EMs的治疗仍然是个棘手的问题。EMs现有的治疗包括手术和／或药物治疗。手术治疗虽可切除病灶并改善患者的疼痛症状，以及提高患者术后妊娠率，但手术本身风险大又具有创伤性，且术后复发率高。药物治疗，包括GnRH-α、达那唑、口服避孕药、孕酮等，虽可暂时缩小病灶，改善患者的临床症状，但全身毒副反应大并且价格昂贵而又不能治愈，限制其长期应用。因此，探索开发有效的新药物用以治疗EMs是目前EMs临床研究的热点。近年临床研究发现，应用药物释放系统局部给药，如芳香酶抑制剂阴道栓、达那唑阴道环、左炔诺孕酮官内缓释系统（曼月乐）等能稳定获得局部药物有效治疗浓度达到临床期望治疗疗效，而全身血液浓度很低以致于几乎不引起药物毒副反应，从而获得临床长期治疗的目的。因此，设想应用疗效肯定的药物通过改变药物给药途径，局部给药使局部达到药物有效治疗浓度以期长期治疗是临床药物治疗EMs患者的一种新思路。棉酚是从锦葵科植物棉籽中分离得到的一种黄色多酚类化合物，以醋酸棉酚的形式被广泛用于医药领域。醋酸棉酚口服多年来被成功用于男性避孕，并有抗肿瘤、抗病毒等活性。近年研究表明，醋酸棉酚口服给药可有效用以治疗EMs和子宫肌瘤等雌激素依赖性疾病，尤其对EMs治疗疗效几乎可达100％。但遗憾的是该药的严重低钾血症毒副反应长期阻碍该药在临床上推广使用。基于醋酸棉酚治疗EMs的疗效，以及局部应用药物释放系统的临床报道。本研究构建EMs大鼠动物模型，设计阴道棒携带醋酸棉酚给药释放系统用以治疗大鼠EMs。旨在探索醋酸棉酚阴道棒的体外释放规律、动物体内动态释放情况，观察醋酸棉酚阴道棒治疗EMs的疗效，并探讨其作用机理。材料和方法选用SD雌性未孕大鼠，体重为（230±20）克，鼠龄8-12周，购自浙江中医学院动物中心（n=56），于动情期或非动情期通过自体子宫内膜层及肌层缝合于Douglas窝，分组建立EMs自体移植动物模型，造模2周／3周／4周后开腹观察Douglas窝粘连情况、异位囊肿颜色、表面血管分布、囊液性状，并测定囊肿体积V（A×B×C，A、B、C分别为囊肿的长、宽、高）。比较动情期及非动情期成模率的差异。选择动情期，将SD大鼠自体子宫内膜缝合于Douglas窝建立EMs大鼠模型，模型复制后3周，第二次开腹，测定囊肿体积；将模型成功组（n=21）随机分为（1）实验组：醋酸棉酚阴道棒给药组（n=10）及（2）对照组：单纯硅胶阴道棒给药组（n=11），按转换因子折算，大鼠4．08mg／kg的剂量近似于临床上50kg成人0.19mg／d的用量，每组于给药7d后择动情期观测药物疗效。观察粘连情况，测定囊肿体积，取囊肿及在位内膜，置中性福尔马林固定过夜，常规石蜡包埋、4um切片，HE染色镜下观（间质、腺体、囊腔），CK及Vim免疫组化染色分别鉴定腺上皮细胞及基质细胞，bcl-2、bax免疫组化染色，并image-proplus 6.0专业图像分析软件分析实验组与对照组bcl-2、bax的表达有无差异。醋酸棉酚阴道棒以硅凝胶混合物为载体材料，其制备为：取硅凝胶（以下简称A）与硅凝胶硫化剂（以下简称B），按照0．9：1．0（w：w）混合均匀；另称取醋酸棉酚适量，按照药物与载体材料的质量百分比为10％，加入混合均匀的硅凝胶乳液，搅拌、混匀得载药的硅凝胶乳液。将药物的硅凝胶乳液注入中空聚氯乙烯塑料管中，在80℃条件下硫化2小时，剪开塑料管，得到醋酸棉酚阴道棒，按照剂量切割成适当的大小。为测定醋酸棉酚体外释放状况，取醋酸棉酚阴道给药棒（含药1mg），放入100ml的释放介质（0．5％Tween-80）中，37℃恒温振荡，60次／分钟，于0、4、12、24、48、96h、6d、8、10、12、14、16、20、24、30、35、40、45、50d取出全部释放介质，并补充等温释放介质50ml。取样1ml样品经0．45μm微孔滤膜过滤，取滤液20μL注入高效液相色谱仪，测定药物含量，按照公式（1）计算药物的累积释放量。研究药物体外释放情况。F（t）=（A_样/A_标）×C_标×V/1000×100％（1）式中：A_样为样品的峰面积；A_标为对照品的峰面积；C_标为对照品浓度（μg／mL）；V为释放介质的体积。样品的高效液相色谱条件为：流动相：甲醇：水（90：10）；色谱柱：DikmaC₁₈-ODS（250 mm×4．6 mm，5μm）；流速：1 ml·min^-1；检测波长：238nm；柱温：40℃；进样量：20μL。为测定醋酸棉酚体内动态释放状况，醋酸棉酚阴道棒按4．08mg／kg的剂量在模型动物（n=18）中给药，分别于给药后0，1，2，3，4，5，10，11，12d取血，每个时间点采3份血样，肝素钠抗凝，离心，分离血浆，置冰箱-20℃冷冻保存。次日进行高效液相色谱仪分离测定药物血浆浓度。样品的高效液相色谱条件为：流动相：0．2％HAC：乙腈=25：75；色谱柱：Agilent Eclipse-XDB（150×4．6mm，5μm）；流速：1．2 ml·min-1；检测波长：235nm；柱温：25℃。结果1．以SD大鼠为模型动物，采用自体子宫内膜及肌层联合缝合于Douglas窝进行EMs模型构建，于建模第3周开腹观察移植内膜生长情况，选择囊肿最大径在2mm以上的囊肿为模型成功者。总成模率为82．35％（42／51）；动情期建模的成模率为82．93％（34／41）；非动情期建模的成模率为80．0％（8／10）。且动物模型建模3周组（0．3759cm³）与4周组异位囊肿体积（0．3843cm³）无明显改变。2．醋酸棉酚阴道棒制备中醋酸棉酚与载体材料的比例为1：9时，体外实验控制释放效果较好，阴道棒中药物的体外释放呈现明显的双相释放特点，在24小时内药物的释放较快，释放总药物量的25％；随后药物的释放速率减缓，15天以后药物呈现恒速释放的特征，每天释放药物量为0．3％，能稳定释放6个月以上。3．醋酸棉酚阴道棒以4．08mg／kg的剂量在模型动物中给药，采血后予高效液相色谱仪分离测定药物血浆浓度。体内血药浓度在24h达到高峰，随后基本保持一极低的血药浓度呈现恒速释放的特征。4．实验组醋酸棉酚阴道棒给药7d后体积抑制率高于对照组处理后，但差异无统计学意义（p=0．247）。实验组给药7d后与对照组处理后腹腔粘连无统计学差异（p=0．790）。5．醋酸棉酚阴道棒给药7 d后，相比对照组，实验组异位囊肿及在位子宫内膜均表现为凋亡增加。实验组异位囊肿bcl-2表达减少（p=0．012），bax表达增加（p=0．004），实验组子宫内膜亦较对照组子宫内膜中bcl-2表达减少（p=0．015），bax表达增加（p=0．007），差异均有统计学意义。实验组异位内膜bcl-2，bax表达量与子宫内膜无差异（p=0．227／0．873）。结论1.SD大鼠自体子宫内膜及肌层联合缝合建立EMs动物模型，动情期建模组与非动情期建模组成模率无明显差异。且模型动物在建模3周后即成模。2.醋酸棉酚阴道棒中药物的体外释放呈现明显的双相释放特点，24h内快速释放部分能够迅速在给药局部达到足够的药物浓度并产生治疗作用，后续的缓释可维持药物浓度产生长期的治疗作用。3．醋酸棉酚阴道棒的体内动态释放中，24h内血药浓度上升迅速，然后长时间维持在一低浓度水平。4.实验组给药7d后体积抑制率高于对照组处理后，提示醋酸棉酚阴道棒给药7d后抑制模型动物中异位囊肿的生长，抑制病灶体积，但此差异无统计学意义。应扩大样本例数以进一步研究。但醋酸棉酚阴道棒对腹腔粘连情况无明显缓解。5．醋酸棉酚阴道棒实验组异位囊肿bcl-2表达减少，bax表达增加，实验组子宫内膜亦较对照组子宫内膜中bcl-2表达减少，bax表达增加，提示醋酸棉酚可能通过促凋亡机制抑制Douglas窝临近病灶，对EMs患者尤其是DIE患者起到治疗作用。