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猪传染性胸膜肺炎（PCP）是由胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起的一种高度传染性、致死性猪呼吸道疾病，以急性出血和慢性纤维素性胸膜肺炎病变为主要特征，自1957年Pattison等首次报道以来已在世界各地广泛流行。本研究是以新疆石河子周边地区几个规模化养猪场为研究对象，通过血清流行病学调查、细菌的分离鉴定以及在此基础上初步建立检测猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ毒素抗体的乳胶凝集方法，为猪传染性胸膜肺炎的快速诊断提供了技术支撑。
1.本研究采用ELISA检测方法对新疆石河子周边地区几个规模化养猪场进行猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ毒素抗体的检测。检测结果显示，猪场PCP总抗体阳性率为61％，各年龄段猪抗体阳性率为：哺乳仔猪27.6％；保育猪64.3％；育肥猪56.5％；母猪76.5％；表明猪群中普遍存在APP感染。
2.从石河子周边规模化养猪场病死猪扁桃体、肺脏组织中利用含1％V因子脑心浸液琼脂培养基分离得到1株细菌，通过菌体形态、染色特性、培养特性、生化特性、对生长因子的需要以及ApxIV基因的PCR快速检测，鉴定该分离株为生物I型即NAD依赖性猪胸膜肺炎放线杆菌，编号为2009JH株。
3.参照GenBank上登录的猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV基因序列(AF021919)从临床分离株中扩增猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIVN端ApxⅣ2.5基因片段，应用软件对序列进行分析,预测可能存在的抗原表位。PCR扩增包含预测抗原表位的ApxIV1（447bp-1949bp）、ApxIV2（1497bp-2873bp）、ApxIV3（1497bp-1949bp）3个片段，将其克隆到pMD19-T载体中经酶切鉴定后构建原核表达载体，将重组表达质粒转入E.coli BL21，经IPTG诱导表达，进行SDS-PAGE电泳分析及Western blot检测。结果显示三个重组质粒诱导表达出蛋白分子量大小为55kDa、50kDa、20kDa。Western blot检测显示除20k大小的蛋白无特异性条带外，其余有很好的反应原性。
4.采用Ni-NTA His.Bind方法纯化pET-28a-ApxIV2表达蛋白，以羧化乳胶为载体，经化学交联的方法致敏乳胶，对致敏乳胶试剂进行自凝性、特异性、重复性、敏感性、对比试验。结果表明，在pH 4.7的PBS缓冲液中，乳胶浓度为2％、蛋白浓度为1.5mg/ml偶联8小时后制备的致敏乳胶凝集反应最好，致敏乳胶抗原无自凝现象；与副猪嗜血杆菌、猪瘟、猪伪狂犬、猪繁殖与呼吸综合征阳性血清不发生凝集；批内重复、批间重复试验很稳定；阳性血清敏感性可达1：32。对比试验中与ELISA方法的符合率为80％，两种方法检测的结果基本相符。表明建立的ApxⅣ乳胶凝集检测方法具有良好的特异性、稳定性和敏感性，初步建立了检测猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ毒素抗体的乳胶凝集方法，为猪传染性胸膜肺炎的快速诊断提供了技术支撑。