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副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HP S)引起猪的一种接触性细菌性传染病,严重威胁着养猪业的健康发展。长期以来,HPS血清型复杂,分型血清制备较困难,方法不标准,为有利于本病的病原学诊断,本试验采用HPS的15个血清型标准菌株制备免疫原免疫健康雄性家兔,成功制备HPS分型血清,并选用琼脂扩散试验对四川地区HPS田间分离株进行血清型鉴定,旨在从病原学角度对四川地区HPS优势血清型的流行情况以及血清型的分布规律进行调查,为四川地区该病的针对性防控提供科学依据。1.HPS分型血清制备的免疫程序的优化筛选从澳大利亚昆士兰州动物研究所购买HPS的15个血清型的标准菌株,对标准菌株进行复苏与鉴定,进一步证实标准菌株的准确性,为分型血清的制备奠定基础。通过对本实验室原有免疫程序进行优化,优化后的免疫程序提高了菌液免疫次数,缩短了免疫间隔时间,降低了免疫剂量,同时基础免疫之前增加了免疫诱导。采用优化后的免疫程序进行HPS5型分型血清的制备,同时以文献报道的3种不同的免疫程序作为对照组,免疫结束后心脏采血,并分离血清,对血清采用琼脂扩散试验进行特异性检测,采用IHA试剂盒进行抗体效价检测。结果表明：血清特异性良好,试验组与对照组家兔血清通过琼脂扩散试验均能产生明显沉淀线,空白对照组琼脂扩散试验未产生沉淀线,并且试验组血清抗体效价达1：32,均高于3个对照组,因此,优化后的免疫程序可推广用于HPS其它血清型分型血清的制备。2.HPS分型血清的制备及其临床应用利用HPS的15个血清型的标准菌株制备免疫原,采用优化后的免疫程序通过皮下注射与耳缘静脉注射免疫原的方式免疫健康雄性家兔,免疫结束后采集心血并分离血清,对血清进行特异性与抗体效价检测,结果表明血清特异性良好,抗体效价均达到1：8以上,用于HPS田间分离菌株的血清型鉴定取得良好效果。本实验室2013年至2014年,从四川22个市区80个猪场中共采集498份病料,从这些病料中共分离出80株HPS。采用琼脂扩散试验对所有分离株进行血清型鉴定,所分离的80株HPS中血清4型占28.75%(23/80)、5型占35.00%(28/80)、12型占6.25%(5/80)、13型占7.50%(6/80)、15型占1.25%(1/80)、不能分型的菌株占21.25%(17/80),结果表明血清型4、5、12、13为四川地区主要流行的血清型,这一结果为四川地区防控HPS提供了科学依据。