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猪链球菌（Streptococcus suis）不仅是猪的重要致病菌,也是全球范围内重要的人畜共患病原菌。根据荚膜多糖（CPS）抗原的差异,猪链球菌可分为29个传统血清型、27种新CPS基因簇菌株（NCL）以及未定型菌株。迄今已知9种血清型能感染人,包括2、4、5、9、14、16、21、24、31型,对公共卫生安全造成严重威胁。2015年泰国报道了首例人感染猪链球菌血清31型的病例,但目前有关猪链球菌血清31型致病与耐药特征的研究很少。本课题组在2017-2019年期间,从江苏某市屠宰场采集健康猪扁桃体和鼻拭子,分离鉴定猪链球菌,发现血清31型分离率最高。因此,本研究继续从江苏某市屠宰场分离鉴定猪链球菌,并对前期从健康猪和临床发病猪分离的猪链球菌31型菌株进行全基因组测序、耐药性试验、斑马鱼攻毒试验等,研究结果不仅有助于了解该地区猪链球菌病的发病规律、制定该地区猪链球菌病的防控策略,而且也为深入了解猪链球菌血清31型的致病和耐药特征提供参考。1.江苏省某市屠宰场猪链球菌的流行病学调查2019年在江苏某市屠宰场采集健康猪扁桃体和鼻拭子样本76份,以看家基因谷氨酸脱氢酶基因gdh和DNA修复蛋白基因recN为目的基因进行PCR鉴定,阳性样本为43份（56.58%）,分离到猪链球菌单菌落66株。与本课题组于2017-2018年间在该市屠宰场采集的样品汇总:2017-2019年期间共采集健康猪扁桃体和鼻拭子样本454份,阳性的样本为311份（68.50%）,共分离到猪链球菌单菌落405株;采用PCR的方法进一步分型鉴定,发现传统血清型有342株（84.44%）,NCL菌株有20株（4.94%）,未定型菌株有43株（10.62%）;传统血清型中31型分离率最高,占16.96%（58/342）,其次是 9 型（14.04%）、16 型（11.70%）、2 型（9.65%）、3 型（8.19%）、4 型（8.19%）、5 型（6.14%）、7 型（5.85%）、8 型（4.97%）、28 型（2.92%）、15 型（2.05%）、11型（1.75%）、21 型（1.75%）、12 型（1.46%）、29 型（1.17%）、23 型（0.88%）、25型（0.88%）、30 型（0.88%）、13 型（0.29%）、17 型（0.29%）。2.猪链球菌31型致病与耐药特征对前期从健康猪和临床发病猪分离的53株猪链球菌31型进行全基因组测序,并与NCBI数据库的23株31型基因组序列一同进行核心基因单核苷酸多态性（SNP）进化分析,所有菌株基因组可分为2个大群:A群和B群。多位点序列分型（MLST）分析发现,53株菌株中只有7株菌的ST型已知,其余都是未知,且与泰国报道的人源分离株43640（ST221）没有亲缘关系。检测53株猪链球菌31型对青霉素、阿莫西林、头孢噻呋、利福平、万古霉素、利萘唑胺、恩诺沙星、麻保沙星、氯霉素、氟苯尼考、林可霉素、克林霉素、泰妙菌素、沃尼妙林、庆大霉素、壮观霉素、替米考星、泰拉菌素、红霉素、多西环素、阿奇霉素等11大类21种抗生素的敏感性,发现多重耐药情况严重,其中屠宰场健康猪分离株WUSS375耐药最严重,多达16重耐药;10重以上耐药多达34.0%（18/53）;血清31型对大环内酯类（耐药率为100%）、四环素类（耐药率为100%）、林可酰胺类（耐药率为100%）高度耐药,对利福平（耐药率为1.9%）、万古霉素（耐药率为1.9%）、β-内酰胺类（耐药率为9.4%）较为敏感;88.68%分离株（47/53）存在大环内酯类耐药基因,90.57%分离株（48/53）存在四环素类耐药基因,77.36%分离株（41/53）存在氨基糖苷类耐药基因,其中erm（B）、ant（6）-Ia和tet（O）的比例分别达到 84.91%（45/53）、71.70%（38/53）、52.83%（28/53）,与其耐药表型大致相符;而林可酰胺类耐药基因只有24.53%（13/53）。从不同批次分离的31型中选择18株进行斑马鱼毒力试验,结果显示有15株对斑马鱼致病力较强,攻毒量为106CFU/鱼时斑马鱼死亡率70-100%;对斑马鱼的致死率为100%的菌株中,有3株分离自发病猪,有1株分离自健康猪。综上结论:猪链球菌31型从进化角度分析具有多样性,且屠宰场中存在毒力强和多重耐药的猪链球菌31型菌株,具有潜在的公共卫生意义。