丁香假单胞菌次级代谢产物研究

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丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae pv.Lachrymans)属于原核生物界,薄壁菌门,假单胞菌科,假单胞菌属(Pseudomonas),是一类专性好氧的革兰氏阴性菌。广泛分布于土壤、淡水、海水以及生物体中。目前关于丁香假单胞菌的研究主要集中在分子生物学,基因组学,蛋白质组学,菌落的鉴定及丁香假单胞菌病害防治等方面,对其次级代谢产物的物质基础研究却鲜有报道。由于丁香假单胞菌可引起三七等中药材叶斑病,严重影响质量和产量,而现今并没有有效抑制丁香假单胞菌的方法,对丁香假单胞菌产生的次生代谢产物作用机理也毫不知情。另外,据有关文献报道微生物的次生代谢产物,在较低浓度下就能够抑制或杀死其它微生物。鉴于上述存在的问题,我们有必要对丁香假单胞菌次生代谢产物进行系统研究。一方面有利于发现新的、有生物活性的化合物,另一方面也能为研究微生物自身代谢产物与其发病机理之间的关系提供科学依据。因此,本课题开展了以下研究:第一部分文献综述本论文通过查阅近十年来国内外有关假单胞菌次级代谢产物的研究报道,综述了假单胞菌属的生物学特性,分类现状,次级代谢产物的分类及生物活性,为假单胞菌的进一步研究提供科学参考,为该属次级代谢产物研究及其生物活性方面提供了理论依据。近年来,越来越多的环二肽从细菌、真菌、放线菌、植物等生物中分离出来,环二肽独特的结构,使其具有多样的生物活性,研究表明环二肽不仅具有显著的抗菌和抗肿瘤作用,在某些细菌群体感应过程中也起到关键作用,是化学生态学的研究热点。本文综述了近十年来环二肽的生物活性报道,以期为环二肽的活性研究提供一定的科学依据。第二部分丁香假单胞菌次级代谢产物研究通过薄层色谱,正相硅胶柱色谱,反相MCI,ODS,Sephadex LH-20色谱等化学分离手段,从丁香假单胞菌发酵液的氯仿萃取层和乙酸乙酯萃取层共分离到19个化合物。通过1H-NMR,13C-NMR,DEPT,1H-1H COSY,HMQC,HMBC,ESI-MS 等手段,并通过与参考文献、GC-MS的比对,最终鉴定出19个化合物,其中包括环二肽类化合物10个:环(L-脯氨酸-甘氨酸)(1),环(L-脯氨酸-L-丙氨酸)(2),环(L-脯氨酸-L-缬氨酸)(3),环(L-脯氨酸-L-亮氨酸)(4),环(L-4-羟基-脯氨酸-L-亮氨酸)(5),环(酪氨酸-亮氨酸)(6),环(脯氨酸-色氨酸)(7),环(L-缬氨酸-L-亮氨酸)(8),环(缬氨酸-异亮氨酸)(9),环(亮氨酸-异亮氨酸)(10),吩嗪类生物碱1个:吩嗪-1-羧酸(11),吲哚类生物碱2个:吲哚-3-乙醇(12),吲哚-3-乙酸甲酯(13),苯环取代类化合物4个:对羟基苯乙醇(14),邻苯二甲酸二异丁酯(15),苯乙酸(16),苯酚(17),脂肪酸类化合物1个:十六碳酸(18),其他类化合物1个:乙酸酐(19)。其中化合物1-19均为首次从丁香假单胞菌发酵液中分离出来,化合物6、9、14、16、17、18、19为首次从该属中分离到。从丁香假单胞菌发酵液中分离的化合物主要为环二肽,共计10个。环二肽,又名2,5-二酮哌嗪,是由两个氨基酸通过肽键缩合形成的,是自然界最小的环肽,该类化合物结构新颖独特、活性多样,尤其是在抗肿瘤药物筛选方面起到关键作用,本文中分到的环二肽1-10均为首次从该菌发现,其中环(酪氨酸-亮氨酸)(6)和环(缬氨酸-异亮氨酸)(9)为首次从该属中分离到,上述化合物对抗菌、抗肿瘤药物的筛选是一种新的来源。另外,从该菌发酵液中分到的生物碱类、苯环取代类、脂肪酸类和乙酸酐也极大丰富了假单胞菌属的化学成分及种类,为进一步的生物活性研究奠定物质基础。创新点:本项目首次对丁香假单胞菌次级代谢产物进行物质基础探索,通过对丁香假单胞菌发酵液不同极性溶剂萃取和分离,一方面为寻求新的、有生物活性的化合物奠定物质基础,另一方面也为探索微生物自身代谢产物与其发病机理之间的关系提供一定的科学依据。
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