氨基酸在乙醇/磷酸氢二钾双水相体系中分离行为的研究

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亲水性有机溶剂/无机盐双水相体系是一种性质温和的分离体系,可适用于生物化工、金属及络合物的分离、中草药中有效成份的提取及有机物的分离等领域。该体系具有体系简单、原料价廉、低毒、无乳化现象等优点,是一种具有潜在工业化应用价值的分离体系。本文对乙醇/磷酸氢二钾双水相体系在298±1 K条件下的成相行为及液液相平衡体系特征进行了较为详细的研究,考察了单一氨基酸在乙醇/磷酸氢二钾体系中的分配行为,并探讨了混合氨基酸在双水相体系中的分离情况,主要内容如下:1.在298±1 K下,绘制不同pH下乙醇/磷酸氢二钾双水相体系的相图。考察了pH值对体系成相的影响,随着体系pH的增大,两相区逐渐增大,成相容易。当pH <6.5时,体系出现盐沉淀而无液液分相现象。2.通过测定两相平衡体系的物理参数(两相组成,密度,折射率等),对体系进行表征。从实验数据可以看出,乙醇/磷酸氢二钾双水相体系,上相富含乙醇,下相富含磷酸氢二钾,分相时间在1min内,这些实验数据及相图对配制和利用乙醇/磷酸氢二钾双水相体系进行物质萃取分离具有重要的参考价值。3.首次考察了五种不同极性,不同支链结构的氨基酸(谷氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸)在乙醇/磷酸氢二钾双水相体系中的分配行为,对磷酸氢二钾浓度、pH及乙醇浓度,温度等对氨基酸分配行为的影响进行了探讨,确定pH和氨基酸的支链结构对氨基酸的分配行为影响较大。4.首次对谷氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸五种混合氨基酸在乙醇/磷酸氢二钾双水相体系中的分离行为进行研究。在梯度洗脱条件下,采用DNFB柱前衍生反相高效液相色谱方法分析两相中的氨基酸,优选出分离苯丙氨酸和半胱氨酸的最佳双水相体系。利用简单、易得、低成本的亲水性有机溶剂/无机盐双水相体系,为分离混合氨基酸提供了一种新的可能,也可以用来预测一些表面结构中含有这五种氨基酸的蛋白质分子在双水相体系中的分离情况。
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