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目的:随着我国人口老龄化的到来以及人民生活水平的提高,心血管疾病的发生率正在逐年提高,而这些疾病多由血管重塑引起。因血管重塑引起的与血管狭窄相关的缺血性血管疾病正严重威胁着人类健康。目前认为,血管中膜平滑肌细胞迁移和增殖是导致远期血管重塑及动脉粥样硬化改变的重要因素。近年来对非编码RNA在血管重塑领域的研究越来越多,我们之前的工作已经证明LncRNAH19可以促进血管平滑肌细胞的增殖,2013年有研究发现LncRNAH19是let-7a的ceRNA。而Cyclin D1是通过调节细胞周期介导细胞增殖的重要蛋白。本研究主要探讨在血管平滑肌细胞中是否存在LncRNAH19/let-7a/Cyclin D1这条调控血管重塑的通路。研究方法:本研究建立大鼠颈动脉血管重塑模型通过免疫组化验证Cyclin D1在血管新生内膜中的表达情况。通过GEO数据库分析let-7a在血管重塑中的表达情况。为了研究let-7a在血管平滑肌细胞中的功能,本研究上调了 let-7a在血管平滑肌细胞中的表达,通过CCK-8实验检查细胞增殖能力的改变,通过细胞流式判断细胞周期的分布情况,通过qRT-PCR和Western Blot检查其对Cyclin D1表达对影响,再通过荧光素酶实验验证let-7a与Cyclin D1的结合关系。为了研究LncRNA H19在血管平滑肌细胞中的功能,首先通过DIANA软件和RNAhybrid分析LncRNAH19和let-7a的结合位点和自由能。本研究上调了 LncRNA H19在血管平滑肌细胞中的表达,通过CCK-8实验检查细胞增殖能力的改变,通过细胞流式判断细胞周期的分布情况,通过qRT-PCR和Western Blot检查其对let-7a和Cyclin D1表达的影响,再在let-7a上调的血管平滑肌细胞中反向检查LncRNA H19表达。最后通过荧光素酶实验和RNA pull-down实验验证LncRNA H19与let-7a的结合关系。结果:免疫组化实验表明Cyclin D1在血管重塑模型的新生内膜上高表达。GEO数据库分析显示let-7a在血管重塑中低表达。CCK-8实验表明上调let-7a可以抑制细胞增殖,上调LncRNA H19可以促进细胞增殖。细胞流式分析表明let-7a过表达的细胞多处于细胞周期的G1期,LncRNAH19过表达的细胞多处于细胞周期的S/G2期。qRT-PCR和Western Blot实验表明上调let-7a可以抑制Cyclin D1的表达,上调LncRNAH19可以促进Cyclin D1的表达。DIANA软件和RNAhybrid分析结果显示LncRNA H19和let-7a相互结合的可能性极大。qRT-PCR结果显示LncRNA H19和let-7a的表达相互抑制。荧光素酶实验和RNA pull-down实验进一步证明了let-7a可以靶向结合Cyclin D1的3’-UTR,LncRNAH19可以吸附结合let-7a。结论:Cyclin D1在血管重塑的新生内膜上高表达;let-7a具有抑制血管平滑肌细胞增殖的功能;let-7a可以靶向抑制Cyclin D1;LncRNA H19可以靶向结合吸附let-7a。以上结果表明LncRNAH19可以通过竞争性结合let-7a,使let-7a表达下调,进而使下游靶基因Cyclin D1表达增多,促进血管平滑肌细胞增殖,导致血管负性重塑。