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柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)是线形病毒科线形病毒属的一种,严重威胁着世界的柑橘生产。在我国,CTV及其强力传媒褐色橘蚜(Toxoptera citricida Kirkaldy)广泛分布。目前,我国柚类栽培面积和产量均居世界首位,经济效益显著,发展前景广阔。但由于柚类优良品种及其砧木多对CTV敏感,随着柚类栽培面积的不断扩大,茎陷点型衰退病的危害呈日益严重趋势。依据国外经验,在CTV强毒系及橘蚜并存的地区,应用弱毒系交叉保护(MSCP)是保证感病品种生产的最有效措施。因此,了解CTV在我国柚类上的发生及株系分布情况,筛选和鉴定有代表性的CTV强、弱毒分离株,尽快为弱毒系交叉保护的应用奠定基础,对保证我国柚类产业的健康发展具有十分重要的意义。 本研究应用直接组织印迹免疫(DTBIA)对不同地区不同品种的450个柚类样品进行了CTV检测;在此基础上,应用RT-PCR、RFLP、BD-PCR对126个柚类CTV分离株进行了初步的鉴定分析;对6个代表性的分离株做了指示植物鉴定和单蚜传毒分离纯化,并对所获得的29个单蚜分离株做了RFLP、BD-PCR、SSCP分析;对6个CTV柚单蚜分离株和2个代表性的CTV柚分离株做了p25、p23两个基因的序列测定并与澳大利亚CTV弱毒分离株PB61及目前世界上已全长测序的CTV分离株T30、T36、T385、SY568、VT、NUAGA的相应序列进行了比对分析。主要结论如下: 1.CTV柚分离株以单一的p25/Hinfl RFLP组群为主,占样品总量的83.3%,其中p25/Hinfl RFLP组群6样品的检出率为69.8%,是目前我国柚类上的优势流行株系。 2.84.1%的CTV柚分离株的p23/BD-PCR产物仅出现一条612bp的特异条带,而未产生与CTV弱毒系相联系的239bp条带及与CTV强毒系相联系的450bp的特征条带。 3.在p25/Hinfl RFLP分析、p23/BD-PCR鉴定以及p23、p25两个基因的序列分析中,CTV分离株S051、S052与弱毒株PB61、T30、T385的表现相应一致,并且在指示植物鉴定中表现为弱毒CTV侵染特征。 4.CTV柚分离株S053、S054、S055、S056、S057和S058的p25/Hinfl RFLP组群为6,p23/BD-PCR产物仅出现一条612bp的特异条带,p23、p25两个基因的同源性与CTV分离株T30、T36、T385、SY568、VT、NUAGA、PB61较远并在系统发生树上聚为单独一簇,可能是中国特有株系。 5.p25/Hinfl RFLP与p23/BD-PCR结合使用对于CTV弱毒株的快速鉴定具有参考价值。