喹赛多是喹噁啉类的一个新品种,具有广谱抗菌、高效促生长和提高饲料利用率的作用。大量研究证明,喹赛多可以有效的促进猪、鸡、鱼等动物的生长,并与同类药物相比毒性小、食品安全性好,具有广阔的开发应用前景。目前,尚无喹赛多在蛋鸭上的研究报道。本试验通过喹赛多在蛋鸭的长期饲养试验,考察喹赛多对蛋鸭的生产性能和蛋品质的影响,确定喹赛多在蛋鸭的最佳使用剂量和时程；检测喹赛多对蛋鸭病原菌携带种类和数量的影响,确定临床有效量；建立鸭蛋和蛋鸭可食性组织中喹赛多及其代谢物的高效液相色谱检测方法,考察各化合物在鸭蛋和蛋鸭可食性组织中的残留消除规律,制定喹赛多在蛋鸭的残留控制标准；并结合喹赛多对鸭常见病原菌的体外抑菌试验等指标评价喹赛多对蛋鸭的有效性与安全性,从而为喹赛多在临床上的合理应用提供理论依据,保障人类的食品安全。1.喹赛多对鸭常见病原菌的体外抗菌活性研究采用微量肉汤稀释法测定喹赛多对5种13株鸭常见病原菌的体外抗菌活性,主要参考标准为临床实验室标准化研究所(CLSI)制定的相关文件。结果表明,喹赛多对鸭常见病原菌有较好的抑菌作用,对鸭金黄色葡萄球菌和鸭多杀性巴氏杆菌抑菌活性最明显,其最小的抑菌浓度(MIC)分别为32和4-8μg/mL,对其他细菌的MIC均在64～128μg/mL之间。除巴氏杆菌外,喹赛多的抑菌效果与盐酸金霉素相当,而对巴氏杆菌其抑菌效果略差于盐酸金霉素,但对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌和鸭疫里氏杆菌的抑菌效果明显的优于杆菌肽锌和喹烯酮。故喹赛多是一种活性较高的抑菌剂,可推荐用作鸭常见病原菌感染的预防药物。2.喹赛多在蛋鸭的长期饲养试验试验选用39周龄江南Ⅱ号蛋鸭2160羽,随机分为4个处理组,每组3个重复,每重复180羽。空白组饲喂不添加抗菌药物的基础日粮,喹赛多试验组饲喂含喹赛多50、100和200mg/kg的加药饲料。预试7天后转入正式试验,试验期为90天。试验期间,每日定时记录每重复组的产蛋个数、蛋重和死淘情况；每周结算一次耗料量。计算平均日耗料、产蛋率、产蛋量、料蛋比、平均蛋重和死淘率。在试验中期和后期,每试验组随机取30枚鸭蛋,进行蛋品质的检测,测定指标主要有蛋重、蛋比重、蛋壳厚度、蛋形指数、蛋黄比率、蛋黄颜色及哈氏单位；从每试验组随机取10羽蛋鸭,翼静脉采血,测定血液生理生化指标。在试验结束后,从每试验组随机取10羽蛋鸭宰杀,取动物的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏,进行组织病理学的检查；从每试验组随机取10羽蛋鸭,无菌条件下取蛋鸭的盲肠,肝脏,肾脏,脾脏,脑,心血和粪便,分离大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和鸭疫里氏杆菌等鸭常见病原菌。喹赛多对生产性能的影响：在整个试验期间(39～50wk),50～200mg/kg喹赛多组对蛋鸭生产性能均有不同程度的影响。产蛋率：各组中100mg/kg喹赛多组的产蛋率最高(91.63%),比空白组提高2.56%(P<0.05),其次为50mg/kg喹赛多组,比空白组提高2.31%(P>0.05),200mg/kg喹赛多组与空白组相当。产蛋量：各组中100mg/kg喹赛多组的产蛋量最高(61.78g),比空白组提高3.31%,其次为50mg/kg喹赛多组和200mg/kg喹赛多组,分别比空白组提高2.90%和0.90%,但差异不显著。蛋重：各组中100mg/kg喹赛多组的蛋重最高(67.44g),比空白组提高0.76%,其次为50mg/kg和200mg/kg喹赛多组,分别比空白组提高0.60%和0.43%,但差异不显著。料蛋比：各组中100mg/kg喹赛多组的料蛋比最低(2.77),比空白组下降3.15%,其次为200mg/kg和50mg/kg喹赛多组,分别比空白组下降2.45%和2.14%,但差异不显著。这些结果表明,在整个试验期间,蛋鸭日粮中添加50～200mg/kg喹赛多均可以有效的提高产蛋高峰期蛋鸭的产蛋率,增加产蛋量,降低料蛋比,改善饲料报酬,其中喹赛多最佳添加剂量为100mg/kg,最佳添加时间为90天。喹赛多对蛋品质的影响：在整个试验期间(39-50wk),50～200mg/kg喹赛多组对蛋鸭蛋品质均有不同程度的影响,其中100mg/kg喹赛多组效果最佳。在试验中期(44wk),100mg/kg喹赛多组的蛋重比空白组提高9.10%(P<0.01),哈氏单位提高13.34%(P<0.01),蛋黄颜色提高6.89%,蛋壳厚度提高8.70%(P<0.01)。在试验后期(50wk),100mg/kg喹赛多组的蛋重比空白组提高6.84%(P<0.01),哈氏单位提高1.73%,蛋黄颜色提高21.72%(P<0.01),蛋壳厚度提高9.33%(P<0.01)。喹赛多对蛋鸭的蛋形指数,蛋黄比率和蛋比重无明显影响(P>0.05)。这些结果显示,在日粮中添加50～200mg/kg喹赛多可有效提高蛋鸭的蛋重、哈氏单位、蛋黄颜色和蛋壳厚度。喹赛多对血液生理生化指标的影响：在整个试验期间(39～50wk),喹赛多各剂量组对蛋鸭的血液生理生化指标无明显变化,均在该动物正常生理参考范围内。在血液生理指标的检测中,喹赛多组的红细胞数量和红细胞压积高于空白组(P>0.05),这与喹赛多可提高蛋鸭的产蛋率和改善蛋鸭的蛋黄颜色结果一致。在血液生化指标的检测中,100和200mg/kg喹赛多组的钾离子分别比空白组升高了1.34%和4.01%,但无显著性差异,病理学检查蛋鸭的肾脏,也未见微观的毒性反应。另外,喹赛多组的血糖(GLU)、谷丙转氨酶(AST)和谷草转氨酶(ALT)较空白组也有所升高(P>0.05),较高水平的GLU、AST和ALT可以促进蛋鸭对营养物质的吸收,这与动物产蛋率的增加呈正相关。喹赛多对蛋鸭体内病原菌携带种类和数量的影响：喹赛多对盲肠中大肠杆菌数量的影响：50～200mg/kg喹赛多可有效地减少盲肠中大肠杆菌的数量,其中50、100和200mg/kg喹赛多组分别比空白组降低了9.1%(P>0.05)、12.5%(P<0.01)和11.2%(P<0.05)。它们之间存在剂量效应关系,随着剂量的增加,大肠杆菌的数量减少的越多,当剂量达到200mg/kg时,大肠杆菌的数量较100mg/kg喹赛多组有所上升,但也明显低于空白组。喹赛多对其它病原菌的影响：50～200mg/kg喹赛多对蛋鸭体内其它病原菌(沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌和鸭疫里氏杆菌)也存在不同程度的抑制作用,并也呈现出剂量效应关系,当喹赛多剂量达到200mg/kg时,蛋鸭体内已分离不到沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌和鸭疫里氏杆菌。说明50～200mg/kg喹赛多可以有效的抑制蛋鸭体内的常见病原菌。3.喹赛多在鸭蛋和蛋鸭可食性组织中的残留消除研究残留检测方法的建立：通过对样品前处理及液相色谱条件的优化,确定最佳条件,建立了喹赛多及其六种主要代谢物在鸭蛋和蛋鸭可食性组织中的高效液相色谱残留检测方法。鸭蛋(蛋白和蛋黄)：先用2%偏磷酸20%乙腈40%甲醇提取,再用乙酸乙酯/三氯甲烷(35：65,v/v)混合液反萃,再经HLB固相萃取小柱进一步净化,高效液相色谱梯度洗脱分离,320nm紫外波长测定。蛋鸭可食性组织：先用1%偏磷酸10%乙腈50%甲醇提取,经HLB固相萃取小柱净化浓缩,再用三氯甲烷反萃HLB柱的洗脱液,达到进一步除杂的效果,用HPLC在320nm紫外波长下测定。结果显示,鸭蛋中,Cyx、Cy1、Cy2、Cy6和Cy12在蛋白中的最低定量限(LOQ)为16μg/kg,Cy9和Cy4分别为8μg/kg和32μg/kg；Cyx、Cy1、Cy2、Cy6、Cy9和Cy12在蛋黄中的LOQ为16μg/kg,Cy4为32μg/kg。蛋鸭可食性组织中,Cyl、Cy2、Cy6和Cy12在肝脏、肾脏、肌肉和皮脂中的LOQ均为200μg/kg；Cy9在肾脏、肌肉和皮脂中为10μg/kg,在肝脏中为20μg/kg;Cyx在肌肉中为10μg/kg,在其它三种组织中均为20μg/kg；Cy4在四种组织中均为40μg/kg。结果表明,喹赛多及其六种主要代谢物在鸭蛋蛋白和蛋黄中的最低定量限在8μg/kg～32μg/kg之间，在添加不同定量限浓度水平上,平均回收率介于64.9%～80.1%之间,变异系数≤9.3%；喹赛多及其六种主要代谢物在蛋鸭可食性组织中的最低定量限在10μg/kg～40μg/kg之间,在添加不同定量限浓度水平上,平均回收率介于63.4%～79.8%之间,变异系数≤10.5%。残留消除研究：43周龄健康江南Ⅱ号蛋鸭连续饲喂100mg/kg喹赛多20天后,检测喹赛多及其代谢物在鸭蛋和蛋鸭可食性组织中的残留量。停药当天(0d),蛋白和蛋黄中均只检出了Cy4,停药1d,蛋白和蛋黄中的Cy4均降至最低定量限以下。组织中,停药6h,肝脏中检测到了六种化合物(Cyx,Cy1,Cy2,Cy4,Cy6,Cy12),肾脏中检测到了五种化合物(Cyx,Cy1,Cy4,Cy6,Cy12),肌肉中检测到了三种化合物(Cyx,Cy1,Cy4),脂肪中只检测到了一种化合物Cy4。停药5d,肝脏、肌肉和脂肪中已检测不到任何化合物,只有肾脏中检测到了一种化合物Cy1。因Cy1在肾脏中消除最慢,残留持续时间最长,故提示喹赛多在蛋鸭的靶组织可能是肾脏,残留标识物可能是Cy1。综上所述,本课题参考我国农业部颁发的实验临床试验技术规范,_开展了喹赛多在蛋鸭的的Ⅲ期临床试验,验证了喹赛多在蛋鸭生产上的有效性与安全性,充分揭示了喹赛多的应用前景。确定了喹赛多对蛋鸭的适宜添加量(100mg/kg),建立了喹赛多及其代谢物在鸭蛋和蛋鸭可食性组织中的残留检测方法,阐明了喹赛多在蛋鸭体内的残留消除规律,为喹赛多在蛋鸭的合理应用提供了科学依据。