【摘 要】
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浑球红细菌2.4.1是研究光合作用及固氮作用的一种模式菌。由于它具有丰富的内膜系统,所以它还是研究膜蛋白的好材料。YidC属于Oxal/Alb3/YidC蛋白家族,它能够帮助其它膜蛋白
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浑球红细菌2.4.1是研究光合作用及固氮作用的一种模式菌。由于它具有丰富的内膜系统,所以它还是研究膜蛋白的好材料。YidC属于Oxal/Alb3/YidC蛋白家族,它能够帮助其它膜蛋白在膜上正确地插入、折叠以及组装,因而也在氧化磷酸化及光合磷酸化等能量代谢中起着重要的作用。目前YidC对浑球红细菌的光合系统及其它膜蛋白的插入、组装研究未见报道。对YidC蛋白的结构研究仅局限于E. coli的YidC的胞外部分,而浑球红细菌2.4.1的YidC的结构还未被研究。本研究通过同源重组的方法获得了在浑球红细菌2.4.1染色体的1173基因中插入果糖诱导的yidC基因和kan抗性基因的突变菌株RSRif(1753-),但是没有获得染色体上yidC基因突变的突变株RSRif(1753-/yidC-)由于没有获得浑球红细菌2.4.1的yidC基因突变株,本研究在大肠杆菌中对浑球红细菌yidC基因的功能进行了研究。将含有浑球红细菌2.4.1的yidC基因的表达质粒在E coli的yidC基因缺失突变株FTL10中诱导表达后发现,浑球红细菌2.4.1的YidC蛋白可以互补E coli的yidC基因缺失突变株FTL10。这说明浑球红细菌2.4.1中的YidC具有与E coli中YidC相类似的功能,它能帮助E.coli中其他膜蛋白正确的插入、整合和折叠,从而使得原来不能生长的FTL10生长。研究还发现,浑球红细菌2.4.1截去C末端最后五个氨基酸残基的YidC突变体蛋白不能使得FTL10生长,这说明这五个氨基酸残基对于浑球红细菌2.4.1的YidC在E.coli中行使YidC正常的功能非常重要。作为膜蛋白,YidC的表达及纯化均具有一定的难度。本研究运用不同的表达载体对浑球红细菌2.4.1的yidC基因进行了表达研究,并分别在E. coli及浑球红细菌2.4.1中进行诱导表达。结果发现,利用表达载体pIND4能够使得yidC基因分别在E. coli及浑球红细菌2.4.1内诱导表达。纯化的结果显示,YidC蛋白在浑球红细菌2.4.1内的表达量比在E. coli内的表达量要高。这一结果为将来进行YidC蛋白的结构研究奠定了基础。
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