A型肉毒毒素（Botulinum Neurotoxin Serotype A，BONT／A）是由肉毒梭菌产生的一种强烈的外毒素，是目前已知最毒的天然物质，一个单分子的肉毒素分子就能阻断一个神经细胞的功能，通过阻断运动神经末梢乙酰胆碱的释放导致机体发生瘫痪，严重者发生呼吸衰竭而死亡。肉毒梭菌是芽孢梭菌，在自然界普遍存在，对人和家畜构成潜在危害。本研究尝试了其保护性抗原基因在大肠杆菌及酵母中的表达。 天然BONT／A的Hc片段基因中AT含量高达76％，其通过同义密码子置换人工合成Hc段基因，将AT含量降到57％。首先将基因亚克隆到由T₅启动子控制的PQE-60表达载体中，构建了原核表达载体PQE-Hc，并在Hc基因的C端融合了含有六个组氨酸的蛋白纯化标签，以大肠杆菌Origami为宿主菌，IPTG诱导表达，重组蛋白分子量约为50kD，表达量约占全菌体总蛋白的6％。对表达产物进行纯化，纯度达到90％以上。 BONT／A的Hc基因在毕赤酵母中的表达。构建了酵母表达载体pPIC9K-Hc，重组质粒含有受甲醇严格控制的乙醇氧化酶（AOX1）基因启动子和卡那霉素抗性基因，pPIC9K-Hc经线性化后转化到毕赤酵母GS115细胞株，使Hc基因整合到毕赤酵母细胞的染色体上，经过选择培养基、PCR鉴定、双层滤膜系统表达筛选、G418筛选后得到一株高表达量的阳性细胞，其表达产物分泌到培养基中，经过SDS-PAGE和Western blot分析证明是所需的目的蛋白。 本论文进行了人工合成的A型肉毒毒素Hc段基因在原核和真核表达系统中的表达研究，使制备大量BONT／A保护型抗原的重组蛋白成为可能，为进一步进行A型肉毒毒素的疫苗或抗体研究奠定了一定的基础。