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马立克氏病(Marek’s disease,MD)是鸡的一种高度传染性、淋巴细胞增生性疾病。过去数十年来,MD一直在我国鸡群中流行,马立克氏病野毒株的致病性似有逐渐增强的趋势,CVI988/Rispens疫苗已广泛应用于我国养禽业MD的防控。2016-2017年期间,广东省珠三角地区不少养禽场报告疑似MD病例。本研究拟开展该时期内珠三角地区MD流行病学调查,并通过羽毛囊中CVI988/Rispens疫苗拷贝数来分析其免疫效果,以期为本地区MD的防控提供参考。本研究通过临床剖检﹑病理组织学、病毒分离鉴定和间接免疫荧光试验(IFA)等对5个疑似MD病例进行流行病学调查;并对分离到的6株马立克氏病病毒(MDV)进行鉴定,分别将它们命名为HD1D、HD7E、HZM01、HZQ03、HZY04和HZS03M毒株;PCR鉴定这6株MDV分离株,均能扩增到pp38片段(873bp)、Meq片段(1200bp)和vIL-8片段(886bp)等,提示这6株分离株均为Ⅰ型MDV。基于MDV血清Ⅰ型特异性单克隆抗体BA4和H19的IFA鉴定结果表明:HD1D、HD7E、HZM01、HZQ03和HZY04分离株均为致病性Ⅰ型MDV。为进一步了解各MDV分离株主要致病相关基因的遗传衍化特点,本研究对各分离株的Meq、pp38和vIL-8序列进行了PCR扩增和克隆测序,序列分析结果表明:HD1D、HZM01、HZQ03和HZY04分离株Meq基因编码的氨基酸序列在K77E、D80Y、V115A、T139A、P176R、P217A等位点与国内MDV超强毒株(GX0101等)出现一致的突变,与国外vv+MDV(584A等)在第217(P-A)位出现一样的突变,在176位点都有突变但是碱基不同;HD1D、HZQ03、HZM01、HZY04和HD7E分离株在pp38基因编码的氨基酸序列中第107位与国内外vvMDV(Md5、GX0101等)都是谷氨酰胺(Q),在109位与CVI988/Rispens疫苗株同为甘氨酸(G);HZM01、HZQ03和HZY04分离株vIL-8基因编码的氨基酸序列在C38R、L110P和D123G位点出现了与GX0101株相同的点突变。基于Meq、pp38和vIL-8基因的遗传进化树分析表明HZS03M分离株与CVI988/Rispens同源性为100%;分离株HD7E与814毒株同源性为100%;其中4株(HD1D、HZM01、HZQ03和HZY04)分离株与国内超强毒株(GX0101等)在同一分支上。由此可推测HD1D、HZM01、HZQ03和HZY04分离株应为vMDV或vvMDV。为调查鸡群免疫CVI988/Rispens疫苗后的效果,本研究通过疫苗株Q-PCR方法检测华南地区不同黄羽鸡场(包括A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和K场)共1031份羽毛囊组织样品中CVI988/Rispens的复制量。结果发现无论是14日龄还是21日龄羽毛囊样品,不同场之间CVI988/Rispens的平均复制量存在差异或显著差异(P<0.05),尤其是在不同品系之间,差异极显著(P<0.001);说明不同场或不同品系之间CVI988/Rispens的平均复制量存在着参差不齐的现象。基于野毒株Q-PCR方法对565份21日龄羽毛囊样品MDV野毒株的检出率为0,但同样方法对24份MD病鸡的羽毛囊进行检测,其中有79.17%(19/24)的样品能检测到野毒株的有效复制。结果提示14-21日龄羽毛囊样品适于CVI988/Rispens疫苗株复制量的监测;而送检的这565份羽毛囊样品没有检测到MDV野毒株。本研究结果表明,广东省珠三角地区有MDV强毒株的流行,鸡场应切实做好MD的防控工作,尤其应实时监测CVI988/Rispens疫苗的免疫效果。