目的：探讨在体外培养中富血小板血浆(PRP)对犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导成骨的影响，为骨组织工程提供依据。 方法： (1)抽取比格犬骨髓，密度梯度离心法分离获取骨髓间充质干细胞；进行原代培养；按1:3传代培养。倒置显微镜观察细胞形态。MTT法测定3、5、10代细胞生长曲线。 (2)抽取比格犬后肢静脉血10ml，两步离心法制备富血小板血浆，人工计数血小板，将富血小板血浆按1:1的比例与含100u/ml牛凝血酶的10％氯化钙溶液激活剂混合反应形成富血小板血浆凝胶。 (3)将第3代比格犬骨髓间充质干细胞分为四组，分别加入含胎牛血清体积分数为10％的低糖DMEM为I组；含胎牛血清体积分数为10％、地塞米松10-8mol/L、β-甘油磷酸钠10mmol/L、维生素C 50mg/L的高糖DMEM为II组；含富血小板血浆凝胶6.25％的低糖DMEM为Ⅲ组；含富血小板血浆凝胶6.25％、地塞米松10-8mol/L、β-甘油磷酸钠10mmol/L、维生素C 50mg/L的高糖DMEM为Ⅳ组。 (4)倒置显微镜观察各组细胞形态变化；碱性磷酸酶检测试剂盒检测各组细胞内碱性磷酸酶含量；改进Von Kossa染色标记钙结节形成情况；免疫细胞化学染色检测各组I型胶原的表达；RT-PCR检测各组骨钙素mRNA的表达。 结果： (1)原代培养后有初起克隆集落形成，并可见细胞分裂相；3d后可见梭形类成纤维细胞明显增多，8～10d单层细胞融合接近90％，呈漩涡样生长。1:3传代的细胞2d左右即可见细胞贴壁，一般10d左右完成贴壁，传3代以后细胞形态均一，呈长梭形，接近融合状态时可呈漩涡样生长。 (2)生长曲线显示传3、5代骨髓间充质干细胞均有较强的增殖能力，其中传3代细胞更为明显，而传10代细胞的增殖能力有所减弱。 (3)人工血小板计数结果为静脉血中血小板为143.5±33.1×109/L，富血小板血浆为1239±174.07×109/L。 (4)倒置显微镜观察Ⅱ、Ⅳ组细胞由梭型渐变为三角形、多角形、圆形，有自发聚集倾向，与Ⅰ、Ⅲ组有明显区别。Ⅲ组细胞增殖较Ⅰ组更快。 (5)各组碱性磷酸酶含量均随时间的延长而逐渐增高，各组比较而言，Ⅳ组活性最高。 (6)成骨诱导14d，改进Von Kossa染色可见Ⅱ、Ⅳ组可见钙结节产生。 (7)成骨诱导14d后，Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色显示Ⅱ、Ⅳ组呈阳性。(8)诱导后7，14d后RT-PCR鉴定各组骨钙素mRNA的表达，各组均分别在185bp有单一的目的条带，诱导后7，14d时间点Ⅱ、Ⅳ组组骨钙素mRNA的表达水平均强于Ⅰ、Ⅲ组；Ⅰ与Ⅲ组之间无显著性差异，而Ⅳ组各表达水平均强于Ⅱ组。 结论： (1)犬骨髓间充质干细胞有较强的生长增殖能力，能在体外诱导剂的作用下诱导成骨。 (2)富血小板血浆能在体外显著促进诱导骨髓间充质干细胞成骨效果，并能够稳定表达成骨特异性表型。