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油菜是我国重要的油料作物,具有较高的经济价值。近几年,在湖北省油菜产区荆门市、孝感市、黄冈市、武穴市和仙桃市发生了较为严重的油菜黑斑病,直接影响了当地农民的经济效益。本实验通过形态学和分子生物学方法将湖北省油菜黑斑病病原菌鉴定为Alternariabrassicicola。在此基础上,研究了不同地理来源的菌株致病力差异以及不同致病力菌株的生物学特性,筛选抗病品种并探讨了该病的药剂防治技术。主要研究结果如下:
从湖北省荆门市、孝感市、黄冈市、武穴市和仙桃市油菜种植地采集油菜黑斑病典型的病样标本,通过常规组织分离法得到A和B两种链格孢属真菌(Alternariasp.),它们的分离频率分别为7.35%和92.65%。用两种类型菌株的菌丝块和分生孢子液接种新鲜健康的油菜叶片和荚果。结果表明,A种类型菌株的菌丝块和分生孢子液接种2d后,即出现黑色坏死斑点;B种类型的菌株不致病。发病组织上再次分离得到的病原菌与接种的病原菌形态一致,表明A种类型菌株是湖北省油菜黑斑病病原菌。形态学观察结果表明,病原菌在PDA培养基上菌落初为白色,3d后菌落变成黑色煤烟状,质地紧密。用滤纸+PCA培养基诱导产孢,培养5天的孢子链链长常超过10个分生孢子,在单根分生孢子梗上形成小树状分枝的分生孢子链。在PCA培养基上25℃黑暗条件下培养7天后,成熟分生孢子褐色,卵形,近椭圆形或倒棒状,具有1~5个横膈膜和0~2个纵、斜隔膜,分隔处明显隘缩;孢身长22.06~62.05×13.79~20.63μm。喙一般不发达,多为单细胞假喙,淡褐色。根据Simmons和张天宇描述的链格孢种的形态特征,将该病菌鉴定为Alternariabrassicicola。该病原菌的rDNA-ITS序列与A.brassicicola的同源性达到100%。根据形态学和rDNA-ITS序列分析结果,确定该病原菌为A.brassicicola。
从湖北省油菜产区采集的油菜黑斑病病样进行组织分离共得到23个致病性菌株。对来自不同地理来源的23个菌株进行致病性测定,发现23个菌株存在致病性差异。仙桃市采集的菌株致病性最强,来自黄冈市采集的菌株致病性最弱。选择XT-1、WX-1和HG-5三个致病性有差异的菌株的生物学特性研究结果表明:菌丝在5-35℃的条件下均可生长,25℃是最适宜的温度。菌丝在pH4.0-11.0范围内的PDB中均可生长,最适pH值为pH6.0-7.0。在Czapek液体培养基中培养,病菌可以利用多种碳源和氮源,在无碳或无氮条件下均可生长;葡萄糖和蛋白胨是该病菌最适的碳源和氮源。菌丝体和分生孢子的致死温度分别为55℃,10min和60℃,10min。
在油菜品种进行抗病性评价中,离体叶片接种结果表明:用致病力强的XT-1菌株的分生孢子液接种,8份表现为抗病,32份表现为中抗,28份表现为感病;用致病力中等的WX-1菌株的分生孢子液接种,23份表现为抗病,36份表现为中抗,9份表现为感病;用致病力弱的HG-5的分生孢子液接种,53份表现为抗病,15份表现为中抗。大田荚果接种结果表明:用致病力强的XT-1菌株的分生孢子液接种,7份表现为抗病,35份表现为中抗,26份表现为感病;用致病力中等的WX-1菌株的分生孢子液接种29份表现为抗病,32份表现为中抗,7份表现为感病;用致病力弱的HG-5的分生孢子液接种,57份表现为抗病,11份表现为中抗。68份油菜材料中没有发现对油菜黑斑病免疫和高抗的品种。
室内药剂筛选试验结果表明,苯甲丙环唑等11种供试药剂在设置的不同浓度下对菌株XT-1的菌丝生长均表现一定的抑制作用,其中30%苯甲丙环唑和10%的苯醚甲环唑的抑菌效果最好,EC50分别为0.10813μg/ml,0.64863μg/ml,其次是16%松脂酸铜、30%恶霉灵水剂和5%井冈霉素A可溶性粉剂,最差的是75%百菌清可湿性粉剂,EC50为268.46050μg/ml。2009年盆栽药剂防病试验结果表明:30%苯甲丙环唑和10%的苯醚甲环唑的防病效果最好,对叶片黑斑病的防效分别为73.08%和69.23%,5%井冈霉素A可溶性粉剂的防病效果最差,防效为38.46%。