大熊猫精浆成分与精液质量关系及提高大熊猫冷冻精子体外受精能力的研究

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本研究采用SDS-PAGE对大熊猫精浆蛋白电泳谱带特性进行分析,使用酶联免疫方法检测精浆血小板激活因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性、化学比色法检测精浆谷草转氨酶(GOT)活性,并初步探讨了这些物质与大熊猫精液质量的关系,结果显示: (1) 大熊猫精浆SDS-PAGE电泳共分离得到12条蛋白谱带,其分子量分别为74.9kDa、59.6kDa、56.2kDa、54.7kDa、47.3kDa、38.2kDa、30.8kDa、23.8kDa、18.4kDa、16.8kDa、14.0kDa和13.4kDa,其中74.9kDa、59.6kDa、56.2kDa、47.3kDa、30.8kDa、13.4kDa谱带为所有个体大熊猫精浆样品所共有。本试验条件下,部分大熊猫精浆出现的特异蛋白带与精液质量无相关性。 (2) 大熊猫精浆存在PAF-AH活性和GOT活性,其平均浓度分别为56.76±60.86mmol/min/mL和194.89±77.40 IU/100mL,PAF-AH含量高低与精子活力呈极显著负相关(R=-0.73,P<0.001),与精子运动状态呈显著负相关(R=-0.58,P<0.05);GOT含量高低与精子活力呈极显著负相关(R=-0.66,P<0.01)。结果提示,精浆PAF-AH和GOT活性高低可以作为评价大熊猫精液质量的参考指标。 本研究还以Ham’s F-10液为基础液,选择添加了不同剂量的己酮可可碱、血小板激活因子、前列腺素PGF三种活性物质,与大熊猫冷冻解冻后的精子在37℃水浴中孵育,探讨了三种活性物质对大熊猫冷冻精子体外受精能力的影响,结果显示: (1) 己酮可可碱、血小板激活因子、前列腺素PGF三种活性物质均能影响大熊猫冷冻解冻精子体外受精能力,但不同活性物质及其不同处理剂量对大熊猫冷冻精子质量的影响存在较大差异。综合各指标检测结果,本试验条件下,己酮可可碱以1mg/mL处理剂量对提高大熊猫冷冻精子体外受精能力效果较好,37℃水浴培养总存活时间达15.33±4.73h,存活指数3.77±0.54h,培养4h时体外异种穿卵率达51.44%,培养6h后7.49%,与对照组差异极显著(P<0.01),并优于其它处理组。 (2) 本试验条件下,PAF 50ng/mL处理剂量下的各质量评估指标优于100ng/mL处理,但用PAF处理精液的时间超过2h后即引起精子质量的显著下降,提示PAF处理精液的时间不宜过长。 (3) 50ng/mL PGF对大熊猫冷冻精子体外功能没有较大影响,较高浓度的PGF则会造成精子活力的损伤和精子顶体反应率降低,导致精子受精能力下降。 (4) 大熊猫冷冻精子低渗膨胀试验中,精子低渗膨胀率与精子37℃水浴存活时间
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