桑椹在成熟过程中易被病原菌侵染致病,其中桑椹菌核病的发生频率最高,此外,也有桑椹果腐病的发生,对我国果桑产业的发展造成了不利影响。在2017年5月进行的桑椹病害调查中,我们发现陕西杨凌农业综合试验示范站桑园有桑椹果腐病的出现,感染桑椹呈现白色,或者出现枯黄、萎蔫的症状。本研究对桑椹果腐病的病原菌进行了分离鉴定,明确了桑椹果腐病的致病菌种类,根据柯赫氏法则对其致病性进行检测,并研究了致病菌的生物学特性。随后,筛选出对病原菌具有较强抑制作用的生防芽孢杆菌,以期为探寻桑椹果腐病的发病原因和规律奠定理论基础,同时也为桑椹果腐病的防治提供科学依据和新的方法。本文的主要研究内容和结果如下:1、使用常规组织分离法,从桑椹果腐病病果中分离得到一株真菌菌株,在PDA培养基上菌落呈圆形,可产生白色气生菌丝和紫色色素。根据显微观察结果,大型分生孢子较少,呈纺锤型或镰刀型,稍弯曲,向两端逐渐变尖,具有2～5个隔膜,大小15.4–40.7×1.4–3.1μm(n=25)。小型分生孢子较多,一端尖细、一端钝圆,大小3.3–9.5×2.0–3.8μm(n=25),无隔膜或有1个隔膜。通过菌落形态和分生孢子形态观察,初步认为其为层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)。利用真菌EF-1a和ITS基因通用引物对DNA进行PCR扩增,对扩增产物进行测序分析,结果表明从样品中分离得到的菌株是层出镰刀菌。2、采用菌饼接种法对该菌株的致病性进行检测,发现层出镰刀菌对桑叶和桑椹均具有较强的感染能力。实验室活体叶片接种结果表明,接种叶片边缘出现黑色或黄色病斑,并伴有白色霉层的形成。随着时间的增加,白色霉层增多,同时这些病斑的颜色加深,面积增大,并从边缘向中间扩展。接种10天后病斑面积扩大至40%-70%,部分病叶腐烂脱落。田间桑椹接种结果表明,接种桑椹发病率为100%,桑椹整个或部分面积由红色变为白色,同时周围未被接种的桑椹也被感染发病。七天后,染病的白色桑果变为暗黄色,果柄部位也发生枯黄。十天后,染病桑果周围的叶片也出现枯黄,萎蔫的症状。根据柯赫氏法则,对接种发病的桑椹及桑叶进行菌株再分离,经过形态观察与分子鉴定确定再分离菌株与原接种菌株相同,实验结果表明层出镰刀菌是桑椹果腐病的致病菌。3、生物学特性研究结果表明,获得的层出镰刀菌Z4,其最适生长温度为28℃,最适p H值为7。在不同的供试碳源中,以麦芽糖最好,对蔗糖利用效果最差。在不同的供试氮源中,硝酸钾为最适氮源,但对硝酸氨和牛肉膏的利用效果最差。4、以分离获得的桑椹果腐病致病菌层出镰刀菌Z4和实验室购买的桑椹菌核病致病菌桑实杯盘菌为指示菌,采用平板对峙培养法从桑椹果腐病病果中筛选出了4株对两种致病菌具有较强抑制作用的生防菌株,实验结果表明,4株生防菌株对层出镰刀菌Z4的抑菌率为47.78%-56.65%,对桑实杯盘菌的抑菌率为84.02%-90.10%。通过形态学和分子生物学鉴定,确定获得的4株生防菌株均属芽孢杆菌属。