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厚壳贻贝(Mytilus coruscus)主要分布于我国东海区域,是浙江省重要的经济养殖贝类。为了解厚壳贻贝血清中抗菌肽mytilin的分子组成和特性,采用分子筛层析和高效液相色谱(HPLC)层析相结合的方法对厚壳贻贝血清进行分离纯化,经质谱鉴定和氨基酸序列测定后,获得3种对革兰氏阳性菌以及阴性菌均有抑制作用的抗菌肽分子,序列分析表明3种抗菌肽具有较高的序列相似性,均属于贻贝抗菌肽mytilin家族,分别命名为mytilin-1,mytilin-2和mytilin-3。其中,mytilin-1为34个氨基酸残基构成的多肽,其分子量为3885.17 Da,含8个半胱氨酸,形成4对二硫键。根据所测mytilin-1的氨基酸序列设计特异性引物,筛选厚壳贻贝血细胞cDNA文库,获得了mytilin-1的cDNA基因并进行了序列分析。结果表明,作为贻贝的主要抗菌肽家族,mytilin在厚壳贻贝血清中具有较高丰度。为获得厚壳贻贝血细胞的表达序列标签(EST)以及可能的免疫相关功能基因序列,从厚壳贻贝血细胞中提取总RNA,以pCMV sport6质粒为载体通过Gateway技术构建高质量的厚壳贻贝血细胞全长cDNA文库,从文库中随机挑选28个克隆进行序列测定及在线BLAST分析。结果表明,在28个随机克隆中,有4个克隆为rRNA基因;7个克隆为未知基因,推测是新基因;17个克隆编码已知功能基因,它们包括脱氢酶,细胞色素氧化酶,热休克蛋白,金属结合蛋白,肌动蛋白等。随后对文库进行大规模测序,得到两种厚壳贻贝mytilin抗菌肽的基因全序列,将其命名为mytilin-A和mytilin-B,其余序列经校对后提交至NCBI dbEST数据库。同时,为了解厚壳贻贝抗菌肽mytilin和myticin的基因组成及其多样性机制,通过设计特异性引物,以厚壳贻贝血细胞cDNA文库为模板进行PCR扩增,共克隆到8种mytilin的cDNA序列和9种myticin的cDNA序列,并对其基因序列及推导的氨基酸序列进行了序列比对和变异位点初步分析。综上所述,利用分子生物学、生物化学、质谱等技术,我们对厚壳贻贝体内抗菌肽成分以及抗菌肽的cDNA序列进行了研究,这些研究为筛选与厚壳贻贝免疫相关的新基因和探讨厚壳贻贝免疫相关因子的分子多样性及免疫机制奠定了基础。