论文部分内容阅读
目的:探讨通过抗γc单抗(抗γ公共链单抗)联合供者脾细胞预刺激(体外)或供者脾细胞特异性输注(体内),选择性清除同种反应性T细胞诱导移植物长期存活的可行性及相关机制。
方法:1、体外部分:体外实验:将CFDA-SE标记BALB/C(H2d)脾细胞与丝裂霉素处理的C57BL/6小鼠(H2b)脾细胞行单向混合淋巴细胞培养(MLC),设立为阳性对照组A,单独BALB/C脾细胞培养作为阴性对照组B并观察增殖情况。实验组C于MLC第1天加入抗γ公共链抗体,第4天流式细胞术观察标记细胞的增殖情况。2、体内部分:(1)分离BALB/C、C57BL/6脾细胞进行单向混合淋巴细胞培养(用丝裂霉素处理后的C57BL/6脾细胞为刺激原)。组1于MLC同时加入抗γ公共链抗体(终浓度100mg/L);组2MLC为阳性对照;培养48hs后经尾静脉输注(108个细胞)给在7天前行C57供者皮肤移植的nudeBALB/C小鼠;(2)建立BALB/C到C57BL/6小鼠颈部异位心脏移植模型,组Ⅰ为对照组,单纯行同种心脏移植;组Ⅱ和组Ⅲ于移植前第7天给予1×107nudeBALB/C脾细胞静脉输注,以及分别于移植前第7、5、3和1天给予生理盐水或抗γc单抗和抗IL-2Rβ单抗混合液尾静脉注射:术后观察移植物的存活时间、血清IL-10浓度、受者淋巴细胞中Tr比例的改变以及同种抗原刺激后增殖活性变化。
结果:1、体外部分:荧光显微镜及流式细胞仪可观察到标记细胞。组A检测到标记细胞荧光强度出现倍减现象,表明细胞发生了增殖;而阴性对照组B及抗γ公共链抗体处理组C荧光强度无明显变化,未观察到明显的细胞增殖。2、体内部分:(1)组2中nudeBALB/C小鼠平均皮片存活时间为14d,组1皮片生长良好,存活时间均>100d(p<0.001),病理学切片显示移植皮片组织层次和血管结构较清晰,仅见少量淋巴细胞浸润,符合皮肤移植耐受表现;且组2血清IL-10水平增高(p<0.001)而脾细胞增殖活性减低(p<0.001)。(2)心脏移植物平均存活时间组Ⅲ为50.17±33.85d,显著长于组Ⅰ(8.67±0.52d,p<0.05)及组Ⅱ(4.83±0.52d,p<0.05);组ⅢIL-10血清浓度较组Ⅰ及组Ⅱ明显增高;FACS分析显示组Ⅲ脾细胞中Tr比例平均3.85±0.59%,明显高于正常C57BL/6的水平(p<0.01);受者脾细胞增殖实验结果显示组Ⅲ增殖活性平均为20.18±0.34%,明显低于组Ⅱ(37.53±0.18%,p<0.001)。
结论:抗γ公共链单抗可抑制同种反应性T细胞增殖活化,联合供者脾细胞预刺激(体外)后回输可诱导C57BL/6到nudeBALB/C小鼠皮肤移植耐受;而抗γ公共链单抗联合供者脾细胞特异性输注,通过清除同种反应性克隆,增加供者体内Tr的比例,减低对同种抗原的应答能力,显著延长同种心脏移植模型中移植物存活时间。