【摘 要】
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香橼(Citrus medica L.)是芸香科柑橘属的药食两用资源。涉及其药理活性的报道甚少。多糖由于其生物活性广且毒性低而备受关注,然而,香橼多糖未有研究。本文以香橼果实为原料,对其多糖进行结构解析和生物活性探究。具体内容如下:(1)使用单因素分析、响应面优化影响热水浸提香橼多糖得率的主要因素。得出理论最优参数:提取次数3次,料液比1:25,提取温度90.63℃,单次提取时间120 min,理
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香橼(Citrus medica L.)是芸香科柑橘属的药食两用资源。涉及其药理活性的报道甚少。多糖由于其生物活性广且毒性低而备受关注,然而,香橼多糖未有研究。本文以香橼果实为原料,对其多糖进行结构解析和生物活性探究。具体内容如下:(1)使用单因素分析、响应面优化影响热水浸提香橼多糖得率的主要因素。得出理论最优参数:提取次数3次,料液比1:25,提取温度90.63℃,单次提取时间120 min,理论最优得率5.65%。根据实际情况调整:料液比1:25,提取温度90℃,单次提取时间120 min,实际得率5.59%±0.024%。(2)对热水浸提的香橼糖液进行分离纯化,并分析纯化组分的理化性质。香橼糖液经脱色,脱蛋白,醇沉,冻干后得到粗多糖(CMs),分别经阴离子交换层析柱DEAESepharose Fast Flow和葡聚糖凝胶柱Sephadex G-100纯化,得到两种分子量相对均一的组分CM-1和CM-2。CM-1和CM-2总糖含量分别为88.74%,93.28%;蛋白质含量分别为0.03%和0.09%,可忽略不计;均不含淀粉和糖醛酸。通过190 nm-500 nm UV光谱扫描以及显色基质鲎试剂盒确认CM-1和CM-2不含有核酸,蛋白质以及内毒素等杂质。经TG-DSC分析,得出CM-1和CM-2热降解行为存在较大差异,CM-2热稳定性更强。(3)利用HPGPC,FT-IR,GC,甲基化分析,1D/2D NMR解析CM-1和CM-2结构。由此可知,CM-1和CM-2的FT-IR图谱表现出多糖的特征吸收峰。经GC分析,CM-1(Mw=21520 Da)主要由阿拉伯糖,木糖,甘露糖和葡萄糖组成,摩尔比例为10.78:11.53:1.00:1.70;CM-1是一种阿拉伯木聚糖,以(1→4)-β-D-Xylp作为线性主链,在O-3位置被α-L-Araf单元取代。CM-2(Mw=22303 Da)主要由阿拉伯糖,甘露糖,葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比例为25.46:1.45:1.00:6.57;CM-2是一种半乳阿拉伯聚糖,是一种特殊的阿拉伯聚糖,以(1→5)-α-L-arabinan为主链,在O-2和/或O-3位置主要被β-D-Galp单元取代。SEM观察到CM-1和CM-2表面形态不一。(4)评估香橼多糖的生物活性,并尝试建立CM-1和CM-2构效关系。研究结果显示,香橼多糖具有潜在的免疫活性:诱导RAW 264.7变形;增强其胞饮能力,通过上调TNF-α,IL-6,i NOS m RNA表达而促进TNF-α,IL-6,NO释放。香橼多糖具有抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7增殖活性,这可能与促进癌细胞凋亡有关。香橼多糖可以通过抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶,改善Hep G2-IR细胞葡萄糖消耗量来发挥降糖效果。香橼多糖具有抗皮肤光老化活性。在免疫刺激性及抗癌活性方面,CM-1比CM-2更有效;于降糖和抗皮肤光老化活性,CM-2效果优于CM-1。CM-1和CM-2生物活性差异可能与分子量,糖苷键类型,骨架结构等差异有关。综上,CM-1和CM-2是新型多糖;香橼多糖具有潜在的免疫刺激性,抗癌,降糖,抗皮肤光老化活性。这些结果为香橼多糖更深入的研究奠定基础,同时,也为香橼药理活性的开发与利用提供有效思路。
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