基于表面等离子体共振技术检测食品中的黄曲霉毒素B1

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黄曲霉毒素(AFT)是寄生曲霉和黄曲霉产生的致癌和致突变的化合物,它主要有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及两种代谢产物M1和M2。在六种化合物中,黄曲霉毒素B1(AFB1)易存在于各类食品以及农产品中,是目前致癌能力最强的天然化合物,严重威胁了人类的生命安全。我国国标(GB 2761-2011)规定以粮食为主要原料的调味品中AFB1的残留量不得超过5μg·kg-1,因此建立快速检测食品、农产品中AFB1的方法尤为重要。表面等离子体共振(SPR)是动态的、无需标记的现代检测手段。核酸适配体是能够特异性识别目标分子的DNA、RNA或者肽,它具有成本低、稳定性好以及容易修饰的特点。本文利用SPR与适配体技术结合检测AFB1。1、本文参考文献,选择的AFB1的适配体的序列为:5’-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTA GGCCCACA-3’。等温滴定量热技术测定AFB1与AFB1-aptamer的结合特性。通过实验优化,最终AFB1和适配的浓度分别为5μM和64μM。在此条件下,AFB1与适配体的KA等于1.51×106±1.68×105M-1,它们之间结合计量数为0.9993±0.0205。2、利用链霉亲和素(SA)和生物素之间的高亲和力,将SA偶联于CM5芯片上,捕获生物素修饰的AFB1核酸适配体;优化AFB1的进样和解离时间,建立AFB1标准品的工作曲线。AFB1的浓度在0.19~200 ng·mL-1,浓度与相应的响应信号成四因素关系;AFB1的浓度在0.19~50 ng·mL-1,浓度与相应的响应信号成线性关系。3、通过优化酱油和醋样品基质中AFB1的提取和纯化方法,用已建立的SPR与适配体结合的方法完成酱油和醋样品中AFB1的检测。当醋中AFB1浓度为2、10、20 ng·g-1(相对于醋的质量),该方法的平均回收率在94.1~125.9%范围内。4、建立液质联用方法检测AFB1,得到的结果与SPR方法做对比。该方法的线性范围为1~200 ng·mL-1,检出限为0.5 ng·mL-1。5、建立液相方法检测AFB1,得到的结果和SPR方法做对比。该方法的线性范围为1.56~200 ng·mL-1,检出限为0.78 ng·mL-1。
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