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研究背景及目的:腹主动脉瘤发病机制复杂,目前已有广泛证据证实其发生发展与血管炎症反应密切相关。研究发现一些细胞因子与腹主动脉瘤炎症反应相关,但是哪一种因子诱导生成腹主动脉瘤,目前仍不明确。相关动物实验已经证实白介素6(IL-6)与T细胞激活分泌调节因子(RANTES)在腹主动脉瘤发病机制中起重要作用,但是其影响腹主动脉瘤的机制目前仍不十分明确。本课题深入研究腹主动脉瘤发生发展过程中IL-6与RANTES的炎症反应机制,对进一步明确腹主动脉瘤的发病机理并进行针对性干预以及临床应用具有重要的意义。方法:本课题主要进行两方面的问题探究:一是IL-6和RANTES与腹主动脉瘤的相关性分析;二是探讨IL-6和RANTES影响腹主动脉瘤形成的机制。分组:1.分析40例腹主动脉瘤患者的临床资料,加入正常对照组40例,根据最大直径将患者分为3组:正常对照组,小腹主动脉瘤患者组(3cm<腹主动脉最大瘤径<5cm)、大腹主动脉瘤患者组(腹主动脉最大瘤径≥5cm),并收集其血液样本。2.收集正常腹主动脉壁组织标本及腹主动脉瘤壁组织标本各3例。3.培养腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞RAW264.7,分为3组:A组:RAW264.7组,只加完全培养基;B组:RAW264.7+IL-6组:加入含有10ng/ml IL-6的完全培养基;C组:RAW264.7+IL-6+RANTES siRNA组:转染RANTES siRNA,用含有10ng/ml IL-6的完全培养基培养。实验主要分为以下几部分:1.ELISA法检测腹主动脉瘤患者血清IL-6和RANTES的水平;2.免疫组化法检测IL-6和RANTES在腹主动脉瘤壁的表达情况;3.qRT-PCR法检测转染siRNA RANTE的转染效率;4.CCK-8法检测IL-6和RANTES对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞增殖的影响;5.Transwell法检测IL-6和RANTES对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞迁移的影响;6.qRT-PCR检测腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞经IL-6以及siRNA RANTES处理后RANTES mRNA水平的表达;7.IL-6和RANTES对STAT3及其磷酸化水平的影响。结果:1.腹主动脉瘤患者血清IL-6和RANTES水平均高于健康者,而腹主动脉瘤组间无差异。2.通过免疫组化染色法检测显示IL-6和RANTES在腹主动脉瘤壁的表达明显高于正常腹主动脉壁。3.siRNA RANTE3的转染效率最高,可有效抑制RANTES的表达利用脂质体2000转染siRNA RANTES入RAW264.7细胞中,qRT-PCR检测分别用三个不同序列合成的siRNA RANTES质粒转染细胞的转染效率,结果表明,三种质粒均降低了RANTES的mRNA水平的表达,且RANTES siRNA3的抑制程度最高。4.IL-6和RANTES促进腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞的增殖随着时间增长,IL-6作用下RAW264.7细胞的活性增高,与RAW264.7对照组比较,差异有统计学意义,表明IL-6对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞增殖的促进作用不断增强。而在转染RANTES siRNA细胞中,与IL-6组比较,差异有统计学意义,表明IL-6对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞的细胞增殖的促进作用被抑制。说明IL-6和RANTES均对腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞的增殖有促进作用,在72小时内呈现时间依赖性增加。5.IL-6和RANTES促进腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞的迁移实验结果显示在使用IL-6后,RAW264.7细胞向下室的迁移的细胞数明显增多,而在转染siRNA RANTES的RAW264.7细胞中,细胞的迁移的细胞数降低。结果表明,IL-6会引起巨噬细胞的迁移,RANTES受抑后阻止了这一过程。6.腹主动脉瘤相关腹腔巨噬细胞经IL-6处理后RANTES mRNA水平的表达升高,siRNA RANTES处理后RANTES mRNA水平的表达降低。7.IL-6和RANTES可激活STAT3的磷酸化表达IL-6对STAT3的表达无影响,但显著促进了RANTES的表达及STAT3的磷酸化。在抑制RANTES表达的RANTES siRNA RAW264.7细胞中,由IL-6激活的STAT3磷酸化被抑制。结论:本研究发现了IL-6和RANTES在腹主动脉瘤血清及瘤壁的高表达,证实了其与腹主动脉瘤的相关性。IL-6和RANTES可激活p-STAT3诱导的巨噬细胞浸润,与MMP表达活性增加以及氧化应激激活相关,具体作用机制有待进一步研究。