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[目的] 支原体是广泛存在于自然界的条件致病微生物。虽然国内外学者对支原体的生物学行为和致病性的了解日趋深入,但有关支原体感染与恶性肿瘤关系的研究目前还刚刚起步,尤其是有关支原体感染在喉癌发生、发展中作用的研究报道甚少。支原体与宿主细胞之间的相互作用,可能启动从细胞膜到细胞核的信号传导,改变许多基因的表达;可以诱导多种细胞因子,对细胞的增殖和分化起作用。支原体慢性持续性感染能引起细胞多阶段恶性转化,与肿瘤形成有关;支原体蛋白能促进肿瘤细胞转移,而一些支原体酶类则能强烈抑制肿瘤细胞生长。喉癌是常见头颈部恶性肿瘤之一,近年来,喉癌发病率有逐年增高趋势,但其发病机制尚未明了。我们以往的研究揭示喉癌的发生与吸烟、饮酒和人乳头瘤病毒(human papillomavirus HPV)等多种因素相关,为了进一步揭示喉癌发生的生物学机制,我们通过检测支原体在喉癌和喉其它不同病变组织中的感染情况,探讨支原体感染在人喉癌发生、发展及预后中的作用。并通过对增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen PCNA)及细胞粘附分子CD44蛋白(CD44 protein)在喉癌和喉其它不同病变组织中表达情况的研究,探讨多种生物学因子对喉癌的协同致癌作用。旨在为喉癌发生、发展及预后相关的生物学因素研究提供一种新的分子生物学依据,为喉癌的早期诊断和防治提供一种新的途径。 [方法] 标本取自1991~2001年本院病理科喉癌和喉其他不同病变手术或活检组织石蜡标本共256例,全部标本分为6组,A:喉癌105例;B:喉癌颈转移淋巴结31例;C:喉癌前病变18例(慢性肥厚性喉炎非典型增生9例,成人型喉乳头状瘤4例,声带白斑5例);D:声带息肉53例;E:癌旁正常喉组织(距肿瘤边缘0.5~1.0cm)20例;F:癌周正常喉组织(距肿瘤边缘>1.5cm)29第二军医大学硕士学位论文例。采用抗猪鼻支原体单克隆抗体PD4(monoclonal antibody PD4)对以上标本进行免疫组织化学Envision法检测;同时采用Envision法检测喉癌和喉其它不同病变组织中PCNA、CD44蛋白表达情况。〔结果〕1.人喉癌组织标本中支原体感染阳性率为44.76%(47/105),喉癌颈转移淋巴 结中为41.94%( 13/31);喉癌前病变中为16.67%(3八8),声带息肉中为13.20% (7/53),癌旁正常喉组织为5.00%(1/20),癌周正常喉组织为3.45%(1/29)。2.105例喉癌组织中,低化鳞癌组织中支原体感染阳性率为73.68%(14/19), 中、高分化鳞癌组织中支原体感染阳性率分别为46.67%(28/60)、 19.23%(5/26)。3.早期喉癌(I一H期)组织支原体感染阳性率为21.05%(8/38),中晚期喉癌 (111一IV期)组织中支原体感染阳性率为58.21%(39/67)。4.颈淋巴结转移阳性的喉癌组中支原体感染阳性率为64.52%(20/31),颈淋巴 结转移阴性的喉癌组中支原体感染阳性率为36.49%(27/74)。5.喉癌工一H期病例中,支原体感染阳性3、5年生存率分别为87.50%(7/8)和 75.00%(6/8),支原体感染阴性3、5年生存率分别为96.67%(29/30)和 96.67%(29/30);喉癌工H一IV期病例中,支原体感染阳性3、5年生存率分 别为71.19%(28/39)和61.54%(24/39),支原体感染阴性3、5年生存率分别 为92.86%(26/28)和89.29%(25/28)。6.PCNA在人喉癌组织中表达阳性率为87.62%(92/105),喉癌颈转移淋巴结中 为83.87%(26/31);喉癌前病变中为44.44%(8/18),声带息肉组织中为 24.53%(13/53),癌旁正常喉组织中为巧.00%(3/20),癌周正常喉组织中 为3.45%(1/29);cD44在喉癌和上述喉其他不同病变组织中表达阳性率分 别为70.48%(74/105)、67.74%(21/31)、38.89%(7/18)、20.75%(11/53)、 10.00%(2/20)和3.45%(l/29)。7.PCNA在工一11期喉癌组织中阳性率为78.95%(30/38),111一IV期喉癌组 织中为92.54%(62/67);CD44则分别为57.89%(22/38)和77.61%(52/67)。8.PCNA在喉癌高、中、低分化组织中表达阳性率分别为57.690k( 15/26)、96.67% (58/60)及100%(19/19);CD44分别为23.07%(6/26)、83.33%(50/60)第二军医大学硕士学位论文 及94.74%(18/19)。9.PCNA在颈淋巴结转移阳性的喉癌组中表达阳性率为96.77%(30/31),颈淋 巴结转移阴性的喉癌组织中为83.78%(62/74);CD44分别为87.09%(27/31) 和63.51%(47/74)。10.PCNA、CD44在喉癌及喉不同病变组织中的表达情况与支原体感染之间存在 正相关关系。[结论〕1.喉癌发生、发展、预后与支原体感染相关。支原体感染阳性率在喉癌组织中 明显高于喉其它病变组织;中、低分化喉鳞癌组织中支原体感染阳性率较高 分化喉鳞癌组织中高;中、晚期喉癌组织中支原体感染阳性率高于早期喉癌 组织;颈淋巴结转移阳性病例的喉癌组织中支原体感染阳性率高于颈淋巴结 转移阴性的喉癌组织;支原体感染阳性病例3、5年生存率低于支原体感染阴 性病例。2.反应喉癌组织中细胞增殖和细胞粘附分子状态的PCNA、CD44蛋白在喉癌组 织中表达阳性率明显高于喉其它病变组织;PCNA、CD44表达在中、低分化 ?