论文部分内容阅读
背景:脑卒中在疾病死因排名中是位列中国第一、全球第二的重大疾病。虽然纤溶酶原激活剂（tissue-type plasminogenactivator,t PA）和机械取栓挽救无数患者生命,但都没有解决幸存患者高致残率的问题。血脑屏障（Blood Brain Barrier,BBB）损伤是导致出血性转化和预后不良的重要病理过程,因此迫切需要开发保护BBB、降低患者残疾率的新药。研究团队前期已证实丹酚酸B和人参皂苷Rg1联用（Salvianolic acid B/Ginsenoside Rg1,SalB/Rg1）抑制心肌内出血,对心肌缺血再灌注损伤后的冠脉血管具有显著保护效果。基于上述研究基础,本课题从维护BBB完整性出发,探讨SalB/Rg1对缺血性脑卒中的保护效果。方法:采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制备24h急性脑卒中动物模型（middle cerebral artery occlusion,MCAO）;采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉2h后复灌24h制备急性脑卒中再灌注损伤模型（cerebral Ischemia/reperfusion,CI/R）;采用Longa评分和左侧偏移摇摆试验（Left-Biased Swings）考察大鼠卒中后的运动功能;采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色（2,3,5-triphenyltetrazole chloride,TTC）评价脑卒中的梗死面积;采用苏木素-依红（Hematoxylin and Eosin,HE）染色评价脑组织的病理组织学改变;采用Nissl染色评价神经细胞数量;采用伊文思蓝染色评价BBB完整性;采用脑干湿重比评价脑水肿;采用明胶酶谱和免疫组化初步探讨SalB/Rg1的作用机制。结果:SalB/Rg1在MCAO大鼠模型上,能显著降低脑梗死面积（22.28±3.77%versus36.78±2.40%,P<0.01）,明显改善神经功能Longa评分（1.89±0.933 versus 3±0,P<0.01）,对左侧摆动比率呈现改善趋势（87.78±15.43%versus 98.57±3.78%,NS）,抑制脑卒中缺血中心区神经元液化坏死进程,维护大脑皮层（116.84±19.37 versus80.23±15.34,P<0.01）、海马CA1区（88.37±15.17 versus 68.35±6.44,P<0.01）、海马CA2（89.77±10.90 versus 68.02±6.70,P<0.01）、海马CA3（86.04±8.92 versus69±8.44,P<0.01）和扣带回（109.34±27.83 versus 59.57±30.42,NS）的神经细胞数量。SalB/Rg1在CI/R大鼠模型上,显著降低梗死面积（13.55±9.37%versus 31.86±10.04%,P<0.001）,明显改善神经功能Longa评分（1.63±1.25 versus 3.0±0,P<0.05）,对左侧摆动比率呈现改善的趋势（73.75±30.38%versus 100±0%,NS）,抑制脑卒中缺血中心区神经元液化坏死进程,维护右侧大脑皮层（117.97±36.65 versus 77.11±21.48,P<0.01）、海马CA1（75.12±6.34 versus 63.23±4.61,P<0.01）、海马CA2（74.35±4.83 versus 69.08±8.92,P<0.001）、海马CA3（79.42±8.13 versus64.71±7.68,P<0.01）的神经细胞数量,对扣带回部位神经细胞呈现保护趋势（115.4±39.39 versus 57.75±31.28,NS）。此外,SalB/Rg1抑制EB外渗保护BBB完整性,降低脑水肿（24±5%versus 18±2%,P<0.001）。明胶酶谱实验结果显示SalB/Rg1显著下调再灌注损伤大鼠MMP-2的活性（20366.34±9398.97 versus 50848.85±45028.57,NS）和MMP-9的活性（21508.04±12124.25 versus 44967.70±37460.37,NS）,并且维护ZO-1在微血管内皮细胞的表达水平。结论:综上所述,SalB/Rg1对持续缺血的脑卒中大鼠和复灌后的脑卒中大鼠都表现出降低脑梗死面积、改善动物行为功能的治疗效果,提示其临床治疗时间窗非常宽泛;SalB/Rg1提高神经细胞存活数量、抑制MMP-2/9活性、提高BBB的完整性,进而降低脑水肿的发生,具有明确的神经-血管双重保护特征,有望为临床脑卒中患者的治疗提供候选策略。