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菜籽ACE(血管紧张素转化酶)抑制肽是指将菜籽蛋白水解成为3-6个氨基酸的小肽,它可以通过抑制ACE的活性来实现降血压作用,相比于合成的ACE抑制剂药物具有安全性高,副作用少,易吸收的特点,是目前国内外生物活性肽研究的热点。利用食品级的枯草芽孢杆菌直接水解菜籽蛋白,可以降低菜籽ACE抑制肽的生产成本,加速菜籽ACE抑制肽的产业化进程。因此,枯草芽孢杆菌生产菜籽ACE抑制肽是一种具有广泛应用前景的方法,此方法在国内外尚未有相关报道。本论文进行了以下四方面的研究:(1)液态发酵法制备菜籽ACE抑制肽菌种的筛选;(2)液态发酵的培养基条件优化;(3)液态发酵的发酵条件优化;(4)菜籽ACE抑制肽的分离纯化。研究结果如下:(1)采用枯草芽孢杆菌,地衣芽孢杆菌,黑曲霉,白地霉,产朊假丝酵母,宇佐美曲霉、雅致放射毛霉对菜籽粕进行液态发酵,以氮溶解指数、SN-TCA,氨基酸态氮、肽得率和ACE抑制活性为评价指标,对液态发酵生产菜籽ACE抑制肽的菌种进行筛选。结果表明:在上述菌种中枯草芽孢杆菌液态发酵所得肽得率最高,并且具有最高的ACE抑制活性,菌种优势明显,是液态发酵菜籽粕生产ACE抑制肽的优势菌种。(2)以菜籽粕为原料,通过枯草芽孢杆菌液态发酵生产菜籽ACE抑制肽。先以肽得率、ACE抑制率为指标通过单因素试验得到液态发酵的培养基条件,再以响应面分析法,优化枯草芽孢杆菌液态发酵培养基中的3种成分,确定枯草芽孢杆菌发酵生产菜籽肽的最佳培养基工艺条件为:磷酸二氢钾0.45%、葡萄糖0.8%、料液比1:23,初始pH7。优化后的ACE抑制率理论值可达69.3%。(3)在培养基条件优化的基础上,对液态发酵的工艺条件进行了进一步的优化。先以肽得率、ACE抑制率为指标通过单因素试验得到液态发酵的发酵条件,再以响应面法分析法,优化了枯草芽孢杆菌液态发酵的工艺条件,确定枯草芽孢杆菌液态发酵生产菜籽ACE抑制肽的最佳发酵工艺条件为发酵时间,发酵温度和接种量,最佳工艺条件分别为20 h、38℃和1×10~8个/mL。优化后的菜籽ACE抑制肽抑制率达到70.95%。(4)将制备得到的菜籽多肽液进行超滤膜分离,凝胶色谱分离,离子交换色谱分离和反向高效液相色谱分离,结果表明:发酵菜籽肽经截留分子量3KD的超滤后,具有较高的ACE抑制性,超滤菜籽肽分别经凝胶过滤色谱分离后,得到5个主要峰,其中R-D(300da)的ACE抑制活性最高,达到73.5%,将R-D使用离子交换色谱分离,得到3个主要峰,其中R-D-B的ACE抑制活性最高,为78.2%,将R-D-B经过反相液相色谱分离后得到纯度较高的ACE抑制肽R-D-B-B,其ACE抑制活性达到88.9%,为较纯肽段。