目的:伊马替尼(imatinib)在复发和转移的胃肠道间质瘤(GIST)中取得了巨大的成功,然而继发性耐药问题逐渐成为临床的一大难点,如何解决imatinib的耐药问题已经成为近年研究的热点之一。本研究旨在探讨胃肠道间质瘤imatinib继发性耐药机制和中药砷剂联合抗血管生成药物沙利度胺对imatinib耐药的GIST的抗肿瘤作用。方法:建立imatinib耐药的人GIST细胞系及其裸鼠移植瘤模型。体外实验,MTT法检测多靶点酪氨酸激酶抑制剂(舒尼替尼,sunitinib)、中药砷剂(三氧化二砷,As203)、沙利度胺(Thal)等药物对imatinib耐药的人GIST细胞系的体外药敏实验。Western blot 法检测 imatinib 耐药的 GIST 细胞(GIST-R,GIST-PR1,GIST-PR2)药物处理前后KIT和P-KIT表达的变化。荧光原位杂交检测imatinib耐药的GIST细胞的KIT基因扩增情况。利用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染技术检测药物处理后细胞凋亡情况。体内实验,通过已建立的人胃肠道间质瘤的裸鼠移植瘤模型,比较舒尼替尼sunitinib、三氧化二砷、沙利度胺以及三氧化二砷和沙利度胺联合组的体内抗肿瘤活性,及其毒副作用。结果:体外实验,MTT检测结果显示三氧化二砷和沙利度胺联合组表现出较强的抗耐药细胞增殖活性,包括对sunitinib相对耐药的GIST-R细胞系。FISH结果显示只有GIST-PR1细胞KIT基因有扩增;FISH分析发现imatinib耐药后的GIST-R细胞发生了KIT基因杂合性缺失,同时免疫组织化学显示CD117表达转阴。Western blot结果显示,药物处理后:sunitinib处理组有活性的P-KIT的表达量下降。三氧化二砷和沙利度胺组单药组:有活性的P-KIT的表达量下降不明显。三氧化二砷和沙利度胺联合组:结果与sunitinib组类似,总的KIT蛋白的表达未见明显变化,但是有活性的P-KIT的表达量下降。流式细胞术结果显示:Sunitinib对GIST-PR1和GIST-PR2这二株imatinib耐药细胞系具有较好的促凋亡作用。三氧化二砷和沙利度胺联合组则对这三株imatinib耐药GIST细胞系表现出较强的促凋亡作用,并呈浓度依赖性,并且联合组对sunitinib相对耐药的GIST-R也有较好的促凋亡作用。体内试验:应用人胃肠道间质瘤裸鼠移植瘤模型(GIST-R)进行体内药敏实验,高剂量As2O3组显示移植瘤生长速度明显减慢,但是副作用大。高剂量三氧化二砷+沙利度胺联合组抑瘤作用也较强,但副作用也较大。低剂量三氧化二砷+沙利度胺联合组,移植瘤生长减慢,毒副反应轻。Sunitinib组抑瘤作用较弱。结论:Sunitinib对imatinib耐药的GIST细胞系具有较好的疗效,但GIST-R除外。As2O3和Thal联合组不但对sunitinib敏感的GIST-PR1和GIST-PR2细胞系有效,对于KIT表达阴性的GIST-R细胞系,联合组也能较好的抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡。本研究结果提示,联合用药组既可以作用于KIT蛋白克服imatinib耐药,也可能绕过KIT蛋白直接作用于下游信号通路而抑制肿瘤细胞的增殖,并促其凋亡。