背景:心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin I,cTnI)是诊断心肌损伤的特异性标识物,检测cTnI已广泛用于临床诊断急性冠脉综合症,判断预后,指导治疗。外周血cTnI升高时判断急性心肌梗死和损伤的金指标。本研究所已建立分泌cTnI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,研制出了检测cTnI的试剂盒,用于临床诊断急性心肌梗死和心肌损伤性疾病,已获得国家Ⅱ类新药证书(体外诊断,国药证字S20040009)。由于抗人cTnI单抗具有高特异高敏感专一识别cTnI,已作为体内心肌损伤诊断试剂和治疗新药的载体,是应用的潜在领域之一。但鼠源性单克隆抗体的人抗鼠抗体反应,半衰期短等缺陷,使之不能用于体内诊断及作为治疗心肌损伤的药物载体,必须对其进行人源化修饰。嵌合抗体是人源化抗体的第一代抗体,这种抗体技术路线较简单,易于操作;抗体完整性好,在体内潴留时间长;鼠源性抗体的亲和力和特异性都得到了保留,在临床上具有潜在的应用前景。目前尚未见有关抗人cTnI单抗人源化改造的文献报道。 目的:克隆人cTnI抗体的Fab段基因,划出可变区基因,构建抗人cTnI嵌合抗体的真核表达载体,转染真核细胞SP2/0,分泌性表达嵌合抗体蛋白,为将来连接某些药物治疗心肌损伤打下基础。 方法:提取分泌cTnI抗体的杂交瘤细胞总RNA,RT-PCR扩增Fab段的重链、轻链基因,将PCR产物连接到pMD-18T载体,转化大肠杆菌,测序证实。划出上述基因序列的可变区部分,重新设计含有