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茶树(camellia sinensis L.)是重要的经济作物之一,在我国具有悠久的栽培历史。种质资源是宝贵的自然财富,是人类利用和改良生物的重要物质基础。作为茶树的发源地,我国茶树种质资源丰富、分布广泛,为茶叶研究提供了优良的原始材料。特异茶树种质资源是数量稀少、分布有限的珍稀茶树种质资源,是进行茶树遗传多样性、杂交育种等研究的宝贵材料。近年来,分子标记技术手段被广泛应用于农作物遗传多样性分析、遗传图谱构建、基因定位等领域。利用分子标记等现代分子生物学技术手段,可以对茶树种质资源进行评价与鉴定、发掘具有重要意义的分子连锁标记等研究,这对推进茶树遗传多样性研究、加快茶树育种进程具有重要的现实意义。但是基于材料原因,对我国现有的一些珍贵的特异茶树种质资源,还未进行过分子生物学方面的系统研究。本实验以具有重大经济价值的8份珍稀特异茶树种质资源和2个主栽茶树品种为实验材料,采用改良SDS法提取基因组DNA,利用50条RAPD随机引物结合已优化的RAPD反应体系和扩增程序对供试材料进行PCR扩增,并分析扩增结果的差异性。 RAPD扩增结果显示：引物S20在实验材料“郁金香”中反复、稳定扩增出长度为298bp的特异性片段,命名为Y20；引物S1、S12和S91在实验材料“紫嫣”中反复、稳定扩增出长度分别为593bp、1091bp和788bp的特异性片段,并分别命名为Z1、Z12和Z91。将这4个特异片段序列进行BLAST比对,未发现与这4个片段有同源性较高的序列,上传至NCBI获得4个GenBank登录号,依次为JN250590JN250592. JN250589、 JN250591。根据这4个片段的测序结果,在原有RAPD随机引物的基础上向内延伸,分别设计了1对SCAR特异引物,Y20的特异引物为SY20(F/R), Z1, Z12和Z91的特异引物分别为SZ1(F/R)、SZ12(F/R)和SZ91(F/R),优化筛选出SCAR-PCR反应体系,分别进行SCAR扩增,且均获得了预期结果。引物SY20(F/R)在退火温度为60℃时,只在“郁金香”中有扩增出唯一的一条谱带,而在其他供试材料中均无相应的扩增带出现；引物SZ1(F/R)和SZ12(F/R)在退火温度分别为63℃和64℃时,只在“紫嫣”中扩增出唯一的一条谱带,而在其他供试材料中均无相应的扩增带出现；引物SZ91(F/R)利用TouchdownPCR扩增程序,67℃退火,以后每个循环退火温度降低0.5℃,保持在62℃退火时,只在“紫嫣”中扩增出唯一的一条谱带,而在其他供试材料中均无相应的扩增带出现,以上扩增重复多次,扩增结果稳定、可靠,且SCAR扩增条带测序结果显分别与对应的RAPD扩增带序列相同,这表明4个RAPD标记均成功转化为SCAR标记,能够对茶树品种进行准确、快速的鉴别。同时,利用Touchdown PCR和多重PCR技术建立了“紫嫣”的三重PCR扩增体系,能够对“紫嫣”进行快速、准确鉴定。SCAR标记的成功转化也为进一步研究这些特异茶树种质资源和利用分子标记技术选育优良茶树品种奠定了良好的基础。