乙型肝炎病毒(HBV)是一种DNA病毒，人类感染HBV后可以表现为不同的临床类型：无症状感染者、急性、慢性、重症乙型肝炎等。其中重症乙型肝炎患者病情凶险，是HBV感染后的重要转归之一，其病死率高，发病机制尚未清楚。现代研究认为重症乙型肝炎的发生，除了和宿主因素有关外，病原学因素是重要影响因素之一。HBV在感染过程中常发生基因变异，由此可导致感染的慢性化和重症化。此外，研究表明：病毒基因型反映了HBV自然感染史发生的变异特点，HBV的基因型可能与感染途径、疾病的进展等有一定的相关性。 目的 本文分两部分①以HBV DNA C基因启动子(CP)区及前S区为研究对象，研究重症乙型肝炎患者HBV DNA发生基因变异时有无位点特异性，探索HBV基因变异在重症乙型肝炎发病中所起的作用 ②应用巢式PCR技术，研究河南地区重症乙型肝炎和慢性乙型肝炎患者中HBV DNA基因型及各型比例，不同基因型与乙型肝炎重症化的相关性，进一步分析HBV DNA基因型、HBV基因变异与乙型肝炎重症化之间的相互关系。 方法 (1)自16例重症乙型肝炎患者的血清提取HBV DNA，聚合酶链反应(PCR)扩增，PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳。随机选取可能存在变异的3份PCR扩增产物，郑州大学医学花忆硕士毕业论文(2004)提纯后核昔酸序列测定，计算机软件分析基因序列的同源性、分析由基因序列推测的氨基酸序列的同源性。 (2)自同一批16例重症乙型肝炎患者及50例慢性乙型肝炎患者血清提取HBVDNA，应用特异性引物，巢式PCR扩增目的片段，琼脂糖电泳，分析不同组乙型肝炎患者的HBV DNA基因型。 结果 (1)16份重症乙型肝炎患者的血清标本的HBV DNA CP区，各条带大小一致，未发现基因缺失变异;前S区PCR扩增产物聚丙烯酞胺凝胶电泳，存在多个水平大小不一的片段，选取3份标本进行同源性分析，其同源性>80%。由基因序列推测的氨基酸序列的同源性为75.4%，未发现特殊突变位点和聚集性突变。 (2)重症乙型肝炎患者的血清标本中HBV均为B基因型，占100%，50例慢性乙型肝炎患者有7例为B型，占14%(7/50)，其余为B、C混合型占86%(4 3/50) 结论 (l)基因变异在重症乙型肝炎患者的HBV DNA的前S区随机出现，主要集中在前S;区下半段、前52区，但不具位点特异性和聚集性突变，而1侣V DNA CP区未发现明显缺失突变，但在HBV DNA其他区域是否存在特征性变异不详。 (2)河南地区重症乙型肝炎患者HBV DNA以B基因型为主，而慢性乙型肝炎患者以B、C混合型为主，HBV DNAB基因型和重症乙型肝炎关系密切。 (3)重症乙型肝炎患者所感染B基因型的HBV基因中，CP区和前S区基因变异无位点特异性和聚集性突变。重症乙型肝炎患者感染的其他基因型别的HBv基因变异是否具有相似突变特征和相关性，有待于进一步探索。