风轮菜总黄酮对心肌缺血性心脏病的保护作用及其机制的研究

来源 :黑龙江中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:chenshunsheng
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缺血性心脏病(coronary artery heart disease,CHD)是一种临床常见的多发性心血管疾病,其发病率处于原发性心脏病的首位,具有较高的发病率和致死率,严重威胁着人类生命健康。随着中医国际化的发展,传统中药在心血管疾病防治中的应用引起了医药界的广泛关注。因此选取确有疗效的中药,深入研究其对心血管疾病的防治机制,明确其药效和作用特点,对于研发治疗心血管疾病的药物具有重要的意义和临床价值。风轮菜(Clinopodiumchinense)为唇形科(Labiatae)风轮菜属(Clinopodium Linn)多年生草本植物,其活性成分含有黄酮类、三萜及其苷类、甾体类、有机酸类、芳香族类等多种化学成分,具有止血活血、抗炎及免疫、降血糖、抗菌、抗肿瘤、抗辐射等药理作用。黄酮成分具有显著的抗氧化活性,但目前对天然产物中黄酮类化合物抗氧化作用的研究以证明其具有抗氧化活性作用为多,也有一些研究涉及分析其结构与抗氧化性的关系,但对黄酮类化合物抗氧化作用实现的途径及其作用机制的研究报道较少。虽然黄酮类化合物因其保护心血管作用受到广泛关注,但到目前为止,黄酮类化合物保护心血管的作用机制仍然没有完全被阐明。因此,选择以天然黄酮为研究对象,基于重要的抗氧化应激通路进行黄酮类化合物保护心肌损伤的分子机制的研究对于揭示黄酮类化合物显著的抗氧化作用内在分子机制具有重要的科学意义。本研究通过对体内、体外实验结合,在分子水平、细胞水平和在体水平上深入研究了风轮菜总黄酮(CTF)对缺血性心脏病的保护作用及其作用机制。体外实验通过H9C2细胞缺氧复氧(H/R)模型检测细胞活力、抗氧化酶活性及细胞内活性氧(ROS),确证风轮菜总黄酮的抗氧化保护作用;通过JC-1及AnexinV/PI染色法、Caspase3荧光活性及Western blot蛋白免疫印迹法检测细胞线粒体膜电位、凋亡及各蛋白的表达,以确证风轮菜总黄酮的抗氧化机制。体内实验通过盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导的急性心肌损伤模型,检测组织心肌酶(LDH/CK/AST)活力、抗氧化酶活性及组织病理学变化,确证风轮菜总黄酮的抗氧化保护作用;通过心肌组织免疫组化、透射电子显微镜观察及Western blot蛋白免疫印迹法检测其抗氧化作用与各通路关系,以确证风轮菜总黄酮的作用机制。体内、体外实验相互佐证,充分阐明风轮菜总黄酮对心肌缺血性心脏病的保护作用及其作用机制。研究结果显示,风轮菜总黄酮对缺血性心脏病有确切的保护作用,其机制与氧化应激、细胞凋亡及PI3K/AKT和MAPK信号通路有密不可分的关系。
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