[研究背景]乳腺癌(BC)是全球女性最常被诊断的癌症之一,也是女性癌症死亡的第二大原因。长非编码RNA (lncRNA)是长度超过200个核苷酸,不具备蛋白编码功能的RNA,曾被认为是转录噪音。随着分子生物学研究的深入,已有越来越多的证据表明lncRNAs在生物过程具有重要意义,如在基因组印记,转录激活和抑制,组织发育过程中lncRNAs起了极为关键调解作用。相关研究同时发现异常表达的lncRNAs在多种人类疾病中出现,其中包括各种类型的癌症。中医对乳腺癌的病因病机早有认识,对乳腺癌的辨证治疗也有独到见解,而肝郁始终被认为是乳腺癌病因病机的关键,也是辨证施治的要点。这不仅提示肝郁证是乳腺癌的重要分型,也为临床治疗提供思路。随着现代医学的发展,实验研究和临床研究均证实肝郁证与乳腺癌密切相关。最近,诸多lncRNAs已显示出在乳腺癌进程中发挥致癌或抑癌作用。但是,对于lncRNAs与肝郁证型乳腺癌关系尚缺乏报道。因此,研究lncRNAs与乳腺癌肝郁证的关系不仅有助于中医证型分析应用,也有助于筛查乳腺癌高危人群,或能提高早期诊断率,寻找新的药物靶标,为临床研究治疗提供新的方案。[研究目的]筛查lncRNAs在乳腺癌中的表达谱。筛选肝郁证乳腺癌相关lncRNAs。研究lncRNAs在乳腺癌肝郁证中可能的作用。评估乳腺癌肝郁证相关lncRNAs的临床价值。[研究方法]第一部分实验首先通过使用基因芯片构建的乳腺癌相关的lncRNAs库。随后利用22对乳腺癌肝郁证患者的癌及配对癌旁组织样本,使用实时定量PCR (qRT-PCR)测试并验证微阵列数据结果的可靠性,筛选出乳腺癌肝郁证相关IncRNA,最后利用生物信息学的方法-基因本体论(GO分析)和通路分析(Pathway分析)分析乳腺癌肝郁证相关lncRNA可能的靶基因和基因产物富集,探讨其可能的与乳腺癌发生发展的关系。第二部分实验,通过收集68对辨证为肝郁证的乳腺癌患者与健康对照人群的血清,通过qRT-PCR验证第一部分中已经确认与乳腺癌肝郁证相关的lncRNA RP11-445H22.4在乳腺癌肝郁证患者及健康人群血清中的表达水平,受试者工作特征(ROC)曲线被用于评估循环血lncRNA RP11-445H22.4在乳腺癌肝郁证患者中的诊断价值。最后我们研究了循环血lncRNA RP11-445H22.4表达水平与乳腺癌肝郁证患者的临床病理因素之间的关系。[研究结果]第一部分实验,基因芯片结果显示在配对的组织样本中有790条上调和637条下调lncRNAs出现显著差异,qRT-PCR的验证结果与芯片结果一致。通过GO分析,我们发现上调的lncRNA与免疫调节有关,下调的lncRNA参与肿瘤的发展进程。通过Pathway分析,我们发现44条通路与上调的转录本相关,31条通路与下调的转录本相关。其中下调的lncRNA可能通过参与钙信号通路影响乳腺癌发生,上调的仍然与机体免疫密切相关。深一步分析,我们发现一条上调的lncRNA RP4-583P15.10,其靶基因为ZBTB46,可能通过免疫机制参与乳腺癌的发生,一条下调的lncRNA RP11-445H22.4靶基因为WISP2,与乳腺癌的进展密切相关。第二部分实验通过与健康对照组对比,我们发现乳腺癌肝郁证患者的外周血lnc RNA RP11-445H22.4表达水平出现了显著升高(p<0.001)。ROC分析外周血lncRNA RP11-445H22.4水平用于乳腺癌诊断的灵敏度和特异性分别为92%和74%,均高于现有的蛋白标志物。与超声诊断相比,lncRNA RP11-445H22.4诊断的特异性与超声接近,但灵敏度更高。相关临床特征研究发现,外周血lncRNA RP11-445H22.4表达水平还与乳腺癌患者免疫组化及绝经情况相关。[研究结论]LncRNA参与了乳腺癌肝郁证的发生发展,其可能的机制是参与机体免疫调节。与传统乳腺癌筛查方式相比,外周循环血lncRNA RP11-445H22.4具有诊断上的优势。具有作为乳腺癌肝郁证患者早期诊断的生物标志物的潜力。