【摘 要】
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目的在本研究中,我们通过体外研究明确高尿酸对心肌细胞凋亡的影响,并探讨氧化应激和氧化型钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(oxidized-Ca2+/calmodulin dependent protein kinase II,ox-Ca MKⅡ)在高尿酸诱导心肌细胞凋亡中的作用机制。方法1.采用（0、5、10、15、20mg/dl）不同的尿酸浓度干预H9C2心肌细胞36小时,或20mg/dl尿酸浓度
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目的在本研究中,我们通过体外研究明确高尿酸对心肌细胞凋亡的影响,并探讨氧化应激和氧化型钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(oxidized-Ca2+/calmodulin dependent protein kinase II,ox-Ca MKⅡ)在高尿酸诱导心肌细胞凋亡中的作用机制。方法1.采用（0、5、10、15、20mg/dl）不同的尿酸浓度干预H9C2心肌细胞36小时,或20mg/dl尿酸浓度干预H9C2心肌细胞不同时间（12小时、24小时、36小时、48小时）,蛋白免疫印迹法检测ox-Ca MKⅡ及Cleaved Caspase-3的表达水平。确定尿酸的最佳实验浓度及时间。2.采用（0、5、10、15、20mg/dl）不同的尿酸浓度干预H9C2心肌细胞不同时间（12小时、24小时、36小时、48小时）,CCK-8法检测H9C2心肌细胞的生存活力。3.尿酸（20mg/dl）干预H9C2心肌细胞36小时,TUNEL染色法检测细胞的凋亡率。4.尿酸（20mg/dl）干预H9C2心肌细胞36小时,或尿酸作用前使用抗氧化剂（NAC）预处理细胞30分钟,用DCFH-DA探针孵育细胞30分钟,荧光显微镜和流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测H9C2心肌细胞细胞内活性氧水平。5.尿酸（20mg/dl）干预H9C2心肌细胞36小时,或尿酸作用前使用抗氧化剂（NAC）、Ca MKⅡ抑制剂（KN93）预处理细胞30分钟,蛋白免疫印迹法检测H9C2心肌细胞ox-Ca MKⅡ和Cleaved Caspase-3的表达水平;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测H9C2心肌细胞的凋亡率。结果1.CCK-8实验结果发现,随着尿酸干预浓度的增加和时间的延长,H9C2心肌细胞活力逐渐降低。2.TUNEL染色结果证实,高尿酸促进H9C2心肌细胞的凋亡。3.采用DCFH-DA探针孵育细胞后,荧光显微镜和FCM结果显示,高尿酸可提高H9C2心肌细胞活性氧水平,且可被抗氧化剂NAC阻滞。4.蛋白免疫印迹法结果证实,高尿酸可增加ox-Ca MKⅡ及Cleaved Caspase-3的表达,且这些作用可被NAC或KN93阻滞。5.Annexin V-FITC/PI流式细胞术结果证实,高尿酸可促进H9C2心肌细胞的凋亡,且这些作用可被NAC或KN93阻滞。结论高尿酸通过氧化应激激活ox-Ca MKⅡ通路诱导心肌细胞凋亡。
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