背景和目的压力性尿失禁（Stress Urinary Incontinence，SUI）是常见的老年性疾病，几乎所有的下尿路症状及许多阴道症状都可见于压力性尿失禁。1977年，国际尿控协会（International Continence Society，ICS）给SUI下了一个定义：膀胱内压超过最大尿道压时，在缺乏逼尿肌收缩的情况下，所出现的社会学和卫生学不能接受的不自觉漏尿，并影响患者的生活。腹压增加下的漏尿是最典型的症状，而尿急、尿频，急迫尿失禁和排尿后胀满感亦是常见的症状。SUI常同时合并生殖器官的膨出和脱垂。50～65岁的妇女25％患有尿失禁，而且随着年龄的增长发病率还会相应的增加。SUI占整个尿失禁发病率的50％以上，其实际发病率比临床统计数值更高。由于其症状的特殊性常会给老年妇女带来巨大生理和心理上的痛苦，并造成严重的社会经济负担。绝经后SUI和盆腔器官脱垂（Pelvic Organ Prolapse，POP）的发生率明显增高，提示SUI及POP的发生与雌激素缺乏有关，雌激素对靶器官的作用是通过雌激素受体（Estrogen Receptor，ER）完成的。近年研究提示，女性SUI患者盆底支持组织胶原蛋白（Collagen）含量显著减少，而胶原蛋白Ⅰ（CollagenⅠ）和胶原蛋白Ⅲ（CollagenⅢ）是胶原蛋白家族中起支持和弹性作用的主要成分，可能是由于它们的减少导致盆底支持组织弹性减弱，出现盆底松弛，进而导致SUI的产生。而转化生长因子-β₁（Transforming Growth Factor，TGF-β₁）的一个重要的生物学作用是调节胶原合成，能增加以胶原为主的间质蛋白质的合成，在组织器官纤维化形成过程中起作用。为研究SUI的发生机制，了解盆底起支持作用的结缔组织中胶原蛋白的改变，以及引起这种胶原蛋白改变的原因，同时，观察盆底结缔组织中雌激素受体的改变，探讨它们在绝经后SUI发生、发展中的关系，我们利用免疫组化的方法观察ER、TGF-β1、CollagenⅠ、Ⅲ在绝经后SUI患者阴道前壁组织中的表达，为绝经后妇女SUI的治疗提供方法和思路。材料与方法1．研究对象选取2005年10月～2006年5月郑州大学第三附属医院妇产科收治的绝经后SUI患者30例（SUI组）、盆腔器官脱垂的患者28例（POP组）；并选择同期非卵巢功能性肿瘤及宫颈上皮内瘤变患者30例作为正常对照观察（正常组），所选患者SUI、POP组均为绝经后妇女，正常组为围绝经期妇女。SUI入选条件：符合SUI诊断标准；近3个月内未服用过激素类药物。POP入选条件：自诉无尿失禁症状，经指压试验，棉签试验及尿动力检查证实无尿失禁；妇科检查均有中度以上阴道前壁膨出：近个月内未服用激素类药物。正常组入选条件：无尿失禁症状；妇科检查无阴道壁膨出或子宫脱垂，近3个月内未服过用激素类药物：术后病理检查证实为非子宫内膜异位症等雌激素相关疾病。正常组和POP组采用阴式子宫切除术和开腹子宫切除术；SUI组采用经阴道无张力尿道中段悬吊（tension-free vagina tape，TVT）术或Burch手术。术中提取患者阴道前壁12点处组织。取下的组织立即放入加有中性缓冲液的10％的甲醛溶液中固定24h，之后用石蜡包埋标本，切片厚度为3μm。部分组织切片行HE染色，以明确组织学结构。2．方法采用免疫组化方法处理切片。经微波处理后，采用SP法，ER、TGFβ₁和CollagenⅠ、Ⅲ抗体及SP试剂盒均购自北京中杉公司，同时设对照组。切片常规脱蜡水化，0.3％H₂O，阻断内源性过氧化物酶，非免疫性羊血清封闭，依次加一抗、二抗及链霉素一过氧化物酶，DAB显色，苏木素复染，透明封片。用PBS液代替一抗、二抗作阴性对照。对每张切片高倍镜下观察计数细胞核ER染色阳性的细胞数（因ER阳性细胞少，均以同种细胞中ER阳性率表示ER染色情况）。经ER染色，细胞核显示棕黄色为ER阳性。以乳腺癌作为阳性对照，磷酸盐缓冲液代替ER单克隆抗体作为阴性对照。转化生长因子TGF-β₁阳性着色呈棕黄色主要位于胞浆，部分定位于胞膜，以每一组切片中阳性细胞所占的百分比为：阴性（-），阳性细胞≦10％；弱阳性（+），阳性细胞11％～30％；阳性（++），阳性细胞31％～70％，强阳性（+++），阳性细胞71％～100％。TGF-β₁表达的阳性率按每组（+）～（+++）的标本总数除以每组的总标本数来计算。CollagenⅠ、Ⅲ则以其阳性表达的辉度值作为比较对象进行比较。3．统计学处理所有数据采用SPSS12.0统计软件包进行处理，两组均数间比较采用t检验；各组间的均数比较用单因素方差分析；样本率的比较用卡方检验；相关分析采用Pearson相关分析。各检验方法均以α=0.05为检验显著性水准。结果1．ER的表达3组患者阴道前壁组织中，ER阳性率均不高，在SUI组、POP组及正常组分别为1.66％、1.83％、2.64％。SUI组与正常组比较，差异有极显著性（p＜0.05）；POP组与正常组比较，差异有极显著性（p＜0.05）；SUI组与POP组比较，差异无显著性（p＞0.05）。2．TGF-β₁表达SUI组、POP组及正常组患者阴道前壁组织中，TGF-β₁表达阳性率分别为20.00％、14.30％、93.33％，SUI组与对照组比较，差异有极显著性（p＜0.05）；POP组与正常组比较，差异有极显著性（p＜0.05）；SUI组与POP组比较，差异无显著性（p＞0.05）。3．CollagenⅠ、Ⅲ的表达3组患者阴道前壁组织中CollagenⅠ含量的表达以辉度值为标准，在SUI组、POP组及正常组分别为98.62±0.28、98.15±0.40和100.03±0.27。SUI组与正常组比较，差异有极显著性（p＜0.05）；POP组与正常组比较，差异有极显著性（p＜0.05）；SUI组与POP组比较，差异无显著性（p＞0.05）。3组患者阴道前壁组织中CollagenⅢ含量的表达以灰度值为标准，在SUI组、POP组及正常组分别为98.46±0.35、98.23±0.18和100.12±0.43。SUI组与正常组比较，差异有极显著性（p＜0.05）；POP组与正常组比较，差异有极显著性（p＜0.05）；SUI组与POP组比较，差异无显著性（p＞0.05）。4．ER与CollagenⅠ、Ⅲ的相关性ER与CollagenⅠ间相关系数r＝0.226，t=2.15，p=0.034，故p＜0.05，ER与CollagenⅠ间呈正相关。ER与CollagenⅢ间相关系数r=0.265，t=2.55，p=0.013，故p＜0.05，ER与CollagenⅢ间呈正相关。结论1、绝经后SUI患者阴道前壁组织中的ER水平低下，导致阴道前壁退行性病变，对尿道的支持力减弱，尿道闭合压降低，可能通过此机制参与SUI的发生。2、绝经后SUI患者阴道前壁组织中的TGF-β₁减少，导致阴道前壁组织中以胶原为主的间质蛋白减少，对尿道的支持力减弱，无法维持正常尿道闭合压，可能通过此机制参与SUI的发生。3、绝经后SUI患者阴道前壁组织中的CollagenⅠ、Ⅲ含量水平低下，直接导致了其对尿道的支撑作用的减弱，影响了正常的尿道闭合压，可能通过此机制参与SUI的发生SUI的发生。