论文部分内容阅读
研究背景及目的作为脊柱损伤最严重的并发症,急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)常引起躯体感觉与功能障碍的严重损害。对患者本人而言,其带来了严重的身体和心理伤害,对整个社会而言,其造成了巨大的经济负担。鉴于此,当今医学界对急性脊髓损伤的预防、治疗和康复给予了越来越多的重视和关注。随着病理生理学的发展,对于急性脊髓损伤的认识也逐渐加深,将其分为原发性和继发性脊髓损伤。由于目前临床无法干预原发性脊髓损伤,继发性脊髓损伤在ASCI中起着重要的作用,而神经细胞的凋亡与继发性脊髓损伤的发生密切相关。因此抑制神经元细胞的凋亡成为ASCI早期治疗的关键。细胞自噬是一种高度保守的生物自我保护机制,可以使变性的蛋白及丧失功能的细胞器降解并重新利用。近年来,研究证实细胞自噬与凋亡有着相互影响。褪黑素(MT)是由松果腺产生和分泌的两性分子,广泛存在于机体内,目前学者普遍认为,褪黑素通过减轻水肿、抑制凋亡、减少氧化应激等机制发挥其保护神经的作用。然而,褪黑素治疗脊髓损伤在抗凋亡方面的机制尚无统一结论。因此,在本研究中,我们通过在ASCI动物模型中予以褪黑素干预,观察急性脊髓损伤后自噬的发生并探讨褪黑素对自噬的影响,研究褪黑素的作用机制,为临床应用提供参考。材料与方法108只成年SD大鼠,按随机数字表法随机分为三组:假手术组(A组)、脊髓损伤组(B组)、褪黑素治疗组(C组)。A组仅行椎板切除,暴露T11-T12节段,不损伤脊髓神经。B组和C组用改良的Allen’s法建立T11-T12脊髓损伤模型,并分别在脊髓损伤后10 min腹腔注射等体积的无水乙醇和100mg/kg的MT制剂。各组分别于术后6 h、12 h、24 h随机选取12只大鼠,取T11-T12节段脊髓标本,6个标本检测自噬相关蛋白的表达水平,6个标本HE染色和免疫荧光切片,观察脊髓损伤及修复情况。术后72h对3组大鼠进行Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分。结果脊髓损伤后,B、C两组均出现了严重的下肢神经功能障碍,在术后72h,C组的BBB运动功能评分较B组明显上升(p﹤0.05);术后各时间点大鼠脊髓的微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平比较:C组最高、B组次之、A组最低。在6h、12 h和24 h时间点上各组之间差异均有统计学意义(p﹤0.05);术后各时间点大鼠脊髓的Beclin-1表达水平比较:C组最高、B组次之、A组最低。在6h、12 h和24 h时间点上各组之间差异均有统计学意义(p﹤0.05);HE染色切片观察脊髓损伤程度:A组最轻、C组次之、B组最重,并且各组损伤时间越长,损伤程度越重;免疫荧光显示:C组LC3阳性神经元细胞最多、B组次之、A组最少。结论大鼠急性脊髓损伤后早期神经组织发生了自噬,应用褪黑素能增强自噬并在一定程度上起到保护神经功能的作用。