乳酸菌是人体肠道微生物组成成分,为普遍公认的安全菌株,应用于食品工业中,作为表达系统的宿主菌相比其他微生物有天然优势。本课题从传统食品中分离到一株乳酸菌,经过16S rRNA测序与序列比对,结合传统的生理生化实验,鉴定为植物乳杆菌的近缘种戊糖乳杆菌,命名为戊糖乳杆菌JS1(Lactobacillus pentosus JS1)。此菌株中含有一个大小为13kb的天然质粒,使用引物步移法获得质粒的序列,拼接得到质粒全长13205bp。通过与NCBI数据库比对,确定质粒为一个新的质粒,命名为pJS1。其G+C含量为35%,有14个开放阅读框。序列分析发现,质粒含有两个复制子,分别命名为ori1与ori2。两个复制子的序列相似达80%,ori1含有长度为22bp的4.8个重复正向重复序列;ori2含有4.5个重复正向重复序列。两个重复序列仅两个碱基差异。在复制子下游均紧接一个可能与复制子相关的repB。为确定最小复制子,将含有复制子序列的不同的片段克隆到大肠杆菌质粒pUCM构建大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体。结果表明,两个含复制子片段均可在胞内复制,ori1的最小复制子包括完整的正向重复序列,完整的复制起始蛋白基因RepB。ori2最小复制子包括完整的正向重复序列,完整的RepB1蛋白基因。宿主范围试验结果表明,该质粒复制子只能在L.plantarum,L.paracasei中复制传代,为一个窄宿主质粒。用绝对定量法测定质粒pJS1在戊糖乳杆菌JS1中不同生长时期的质粒拷贝数,结果显示,在对数期前期拷贝数最高,有19个拷贝,之后拷贝数逐渐降低,到对数期末期到稳定期,拷贝数稳定为7个。对含有质粒复制子ori2的重组子进行的传代稳定性试验,结果表明,构建的穿梭载体在宿主中稳定,100次传代的代间丢失率低于5%。利用ori2构建的表达载体,以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为指示蛋白,结果表明,在L.plantarum ST-III,L.plantarum LPHS,L.paracasei LPC-37中均可成功检测到荧光。