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胃食管反流病是一种常见的多发性消化道疾病,发病过程中多呈现烧心、反酸等不适症状,一定程度上影响了患者的生活质量,如若长期得不到良好的治疗,更会引发食管炎、食管癌等严重疾病。目前的常规治疗方法对于较为敏感的特殊人群具有一定的风险,因此,研发针对胃食管反流的新型特医食品具有重要的临床意义。Transient receptor potential vanilloid 1(TRPV1)是一种瞬时感受电位通道,在机体疼痛反应和炎症发生过程中起到决定性的作用。以往研究发现,TRPV1在食管神经细胞中参与了“灼烧感”的神经信号传递过程,与胃食管反流病的发生发展有重要联系。然而,作为对反流过程中胃酸刺激首当其冲的食管上皮细胞,其TRPV1参与的胃食管病理过程的机制尚不明朗。本研究通过酸性溶液模拟反酸微环境,在人食管上皮细胞(HET-1A)以及小鼠胃食管反流病模型中进行TRPV1参与胃食管反流的机制研究;并从食药同源分子的角度出发,筛选了可行性较高的TRPV1靶向抑制成分——薄荷醇,对其治疗效果进行了一系列功能验证。主要研究内容和结果包括以下两个方面:(1)TRPV1参与食管上皮细胞中胃食管反流病理过程的机制研究。体外实验中,利用酸性培养基刺激HET-1A细胞模拟胃食管反流过程的酸性微环境,检测细胞中的TRPV1表达变化,转录和蛋白水平均检测到酸性刺激引起的TRPV1表达增加。通过钙成像实验考察酸性刺激前后细胞中的钙内流变化,并且利用siRNA沉默HET-1A细胞中的TRPV1表达以探究TRPV1的作用;结果证实TRPV1在细胞钙内流的过程中起到主导作用,钙内流强度会被酸性刺激所增强,从而引起细胞钙信号紊乱,炎症因子的增加。通过滴灌法建立小鼠胃食管反流病模型,再分离小鼠食管进行生化和病理分析,发现酸性刺激后,小鼠食管黏膜上皮中TRPV1表达增加,出现炎症反应以及上皮增生和角化多度的病症。(2)靶向性食药同源分子的效果验证,即薄荷醇对胃食管反流病的治疗效果分析。体外实验中对于酸性刺激处理过的细胞给予薄荷醇治疗,分析细胞中TRPV1的表达变化、钙内流变化以及炎症因子变化;结果证实薄荷醇能够明显减轻酸性刺激引起的TRPV1表达增加、钙信号紊乱和炎症反应过程。胃食管反流病模型的小鼠给予薄荷醇治疗后,再通过免疫组织化学分析及H&E染色分析食管上皮中的TRPV1表达变化及病理变化;结果发现TRPV1的表达水平明显降低,对于酸性刺激导致的体重和进食量减少有一定缓解效果,酸刺激引发的生理不适症状也明显改善,炎症反应得到显著缓解。综上,食管上皮细胞中的TRPV1是胃食管反流过程中重要的响应元件,其通过影响细胞的钙信号通路介导炎症反应;薄荷醇能够靶向TRPV1,对胃食管酸反流引起的炎症具有抑制作用,结果证实薄荷醇具有治疗胃食管胃酸反流引起的相关疾病的潜在价值。