牙周病不仅会造成牙齿的缺失，还会对牙槽骨造成难以修复的损伤，一旦患病，患者的生活质量和身体健康将受到极大的影响，所以对于牙周病的治疗一直是口腔医学界的关注焦点。传统的牙周治疗方法不能根治牙周病，即无法使损坏的牙周组织完全恢复，一种新的治疗方法—“基因治疗”有望与牙周组织工程结合起来以实现这个目标：首先细胞经特殊基因修饰重组于体外培养后，通过特殊的载体和支架材料依附于牙槽骨，重组后的基因蛋白可以促进细胞的再生和定向分化，达到修复组织和重建功能的目的。基因治疗中种子细胞和基因载体的选择是成功的关键，以往的研究中，牙周膜细胞是应用最多的种子细胞，本实验则选择了牙囊细胞（Dental follicle cells，DFC），它是包绕在成釉器外围的一层疏松的结缔组织，能在一定的时间和阶段向牙周膜成纤维细胞、成骨细胞、成牙骨质细胞分化，在牙齿发育后期形成牙骨质、牙周膜和固有牙槽骨，可见，牙囊细胞对实现牙周组织再生起着关键性作用。基因载体方面目前应用较多的是病毒载体和以脂质体为代表的非病毒载体，前者能自然且高效的向靶细胞传递基因，却因为存在毒副作用等安全性问题被限制使用，后者较安全，但是靶向性弱、运输效率低，因此急需寻找既安全又高效，同时制备简单、操作容易的基因转移方式。近些年有研究认为以超声结合微泡造影剂进行基因转染是可行的，理论上较传统方法更为安全有效，其原理主要是作为载体的微泡在超声作用下发生“空化效应”，更利于基因的靶向转移，同时细胞膜受到此效应影响发生“声孔效应”，进一步促进了基因片段的定向转移。由于不同细胞的生物特性不同，所以有必要研究不同的超声微泡参数组合转染不同细胞的生物效应，以为其广泛应用提供理论基础，因此本实验首次以大鼠牙囊细胞为对象，初步探讨用超声结合微泡造影剂技术介导pEGFP-N1质粒进行转染后的转染效率及对细胞活性的影响，为牙周组织基因治疗的基础研究提供参考。目的：探讨微泡造影剂在不同辐射时间和强度的超声作用下，介导pEGFP-N1质粒转染大鼠牙囊细胞的效率及其细胞毒性作用，为基因治疗实现牙周组织再生提供理论依据。方法：体外培养原代大鼠牙囊细胞，在不同辐照时间（15s、30s、45s、60s）和辐照强度（0.5W/cm2、1W/cm2）的超声波照射下，以微泡造影剂为载体介导质粒pEGFP-N1进入其中，筛选出转染率最高的辐照强度+时间参数组合，同时将它与普通脂质体转染后的效率相比较，分为质粒组、超声+质粒组、微泡+质粒组、超声微泡+质粒组、脂质体+质粒组，并用MTT法检验转染率较高的各组细胞的增殖抑制率即细胞存活率。结果：1.免疫组化实验证实培养的细胞为大鼠牙囊细胞，其来源为外胚间充质。2.在不同声强和辐照时间的照射下，转染率最高的参数组合为超声强度0.5W/cm2、辐照时间30s。3.辐照时间30s的两组细胞增殖抑制率略高于脂质体组；声强0.5W/cm2、辐照时间15s组的细胞增殖抑制率低于脂质体组，其余各组增殖抑制率明显高于以上几组。结论：与传统脂质体转染法相比，一定范围内的超声结合微泡造影剂转染rDFC效率显著提高，细胞毒性作用却没有因此增大，故更利于今后基因工程研究的应用。