【摘 要】
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目的探索溶菌酶保护的金纳米团簇对成骨细胞及破骨细胞的作用和其潜在作用机制。方法1、构建溶菌酶保护的金纳米团簇（Lys-Au NCs）并通过高分辨透射电镜（TEM）观察材料尺寸。2、通过Cell Counting Kit-8（CCK8）检测Lys-Au NCs对MC3T3E-1细胞（小鼠胚胎成骨细胞前体细胞）、RAW 264.7细胞（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）和NIH/3T3细胞（小鼠胚胎细胞）的
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目的探索溶菌酶保护的金纳米团簇对成骨细胞及破骨细胞的作用和其潜在作用机制。方法1、构建溶菌酶保护的金纳米团簇（Lys-Au NCs）并通过高分辨透射电镜（TEM）观察材料尺寸。2、通过Cell Counting Kit-8（CCK8）检测Lys-Au NCs对MC3T3E-1细胞（小鼠胚胎成骨细胞前体细胞）、RAW 264.7细胞（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）和NIH/3T3细胞（小鼠胚胎细胞）的增殖速率的影响。3、通过免疫蛋白印迹和共聚焦荧光成像分析Lys-Au NCs对胶原蛋白1（Col-1）、碱性磷酸酶（ALP）和PI3K/Akt信号通路的影响。4、通过茜素红染色和碱性磷酸酶染色分析Lys-Au NCs对成骨诱导过程中的骨矿化程度的影响。5、将核因子κB配体（RANKL）与巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）连续诱导RAW 264.7细胞使之成为破骨细胞,通过免疫蛋白印迹和共聚焦荧光成像分析Lys-Au NCs对抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和NFATc-1/c-Fos/V-ATPase-d2/CTSK信号通路影响。结果研究结果表明Lys-Au NCs具有超小的尺寸,在体外细胞实验中,发现Lys-Au NCs无明显毒性且能促进成骨细胞增殖。在成骨分化实验部分中,与溶菌酶,相对较大尺寸的金纳米颗粒（Au NPs）或溶菌酶和金纳米颗粒（Au NPs）的混合物相比,Lys-Au NCs更能够促进Col-1、ALP表达和上调PI3K/Akt信号通路,表现出了更加明显的促进成骨细胞分化的效果;而在破骨细胞诱导实验中,Lys-Au NCs能够抑制TRAP、NFATc-1表达和下调NFATc-1/c-Fos/V-ATPase-d2/CTSK信号通路,进而抑制破骨细胞形成。结论我们设计了一种用于骨质疏松症治疗的超小型生物相容性纳米材料-基于溶菌酶保护的超小金纳米团簇,探究发现该材料可以通过上调PI3K/Akt信号通路与下调NFATc-1/c-Fos/V-ATPase-d2/CTSK信号通路实现对成骨和破骨的双重调节,存在潜在的骨质疏松治疗作用,有望成为治疗骨质疏松的纳米药物之一。
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