环介导恒温扩增技术检测结核分枝杆菌和超级细菌的研究

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近年来,结核病的发病率仍有逐年增加的趋势,结核菌耐药性愈加增强,引起了社会各界的广泛关注,准确且及时的诊断结核病,第一时间确诊活动性肺结核,对于阻断传播途径、有效控制传染源、追踪传染源、有效控制结核病的暴发及流行方面具有重要意义。本文针对结核分枝杆菌IS6110基因用PrimerExplorer V4软件设计组2引物,在LAMP反应体系下进行检测。结果表明:[8]、[23]号两组引物引发的反应速率不同。选择[23]号引物组进行灵敏度和特异性实验,发现其灵敏度比PCR检测方法提高了2个数量级。用LAMP和PCR方法对197例结合病例进行检测,结果表明LAMP方法的敏感性、特异性、真阳性率和真阴性率明显优于PCR方法。经kappa系数验证,LAMP方法与金标准的一致性更高。上述实验结果验证了LAMP检测方法的优势。因此本研究进一步用LAMP方法来检测NDM-1基因,结果表明:通过四组引物组的筛选试验,确定[1]号引物组的优越性,成功的建立了检测NDM-1基因的LAMP反应体系。同时设计了免开盖的一步操作法,大大提高了检测过程的安全性。LAMP检测方法与传统PCR检测方法的对比,实现了NDM-1基因快速、安全检测,为阻断传播途径、有效控制并追踪传染源、有效控制超级细菌的暴发及流行方面具有重要意义。
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