背景:结直肠癌是常见的消化道肿瘤之一,全球每年新发病例及死亡病例数居恶性肿瘤第3位与第4位。50%以上结直肠癌根治术后患者最终会发生复发转移,是结直肠癌术后患者死亡的主要原因。扶正解毒方是首都国医名医、全国名中医朴炳奎教授临床治疗结直肠癌的经验方,临床能有效防止结直肠癌侵袭转移。EMT是肿瘤转移的常见诱因,而miR21/PDCD4/AP-1信号通路的表达改变可能是结直肠癌发生EMT以及侵袭、转移的主要原因。我们推测,扶正解毒方是通过作用于miR21/PDCD4/AP-1信号通路,逆转EMT形成,来抑制结直肠癌的复发转移的。目的:明确扶正解毒方逆转EMT防止大肠癌复发转移与EMT关键靶点方法:1、体内实验建立人高转移结肠癌Lovo细胞裸鼠皮下移植瘤模型,设立扶正解毒方组与对照组,皮下接种Lovo细胞后,用药干预28天,观察扶正解毒方对皮下移植瘤重量及EMT相关蛋白;2、体外实验使用SD大鼠制备扶正解毒方低、中、高剂量组含药血清及空白血清。使用不同剂量组的扶正解毒方含药血清及空白血清培养Lovo细胞,CCK8法检测扶正解毒方含药血清对Lovo细胞的抑制率,观察扶正解毒方含药血清在二维培养条件下对Lovo细胞形态学影响及侵袭迁移能力的影响,并提取扶正解毒方含药血清及空白血清培养条件下Lovo细胞的总蛋白,通过Western Blotting检测扶正解毒方含药血清对Lovo细胞EMT相关蛋白及可能作用靶点蛋白表达量的影响;通过慢病毒感染技术构建过表达miR-21及空白对照Lovo细胞稳转株,验证扶正解毒方含药血清对EMT相关基因及可能作用靶点mRNA的影响。结果:1、扶正解毒方在体外能抑制人高转移结肠癌Lovo细胞增殖,体外高剂量含药血清组72h抑制率35%;2、空白血清培养72h后,Lovo细胞呈长梭形,并出现卷曲、拉丝,呈上皮细胞、间质细胞两种形态,以间质细胞形态为主;扶正解毒方低剂量组含药血清培养72h后Lovo细胞之间拉丝减少,仍呈上皮细胞、间质两种形态,中剂量组含药血清培养72h后Lovo细胞基本在平面生长,仍有少数细胞呈细长丝状,高剂量组含药血清培养72h后,Lovo细胞呈多角形及梭形,单层紧密排列,大部分Lovo细胞形态恢复上皮细胞样;3、扶正解毒方含药血清低、中、高剂量组均能不同程度的抑制Lovo细胞迁移,其中高剂量组效果最佳;4、Transwell小室过膜Lovo细胞数:扶正解毒方高剂量组<扶正解毒方中剂量组<扶正解毒方低剂量组<空白血清组。5、扶正解毒方含药血清能促进Lovo细胞体外培养条件下E-cadherin、PDCD4、mRNA的表达,较空白血清组有显著差异,且能抑制Lovo细胞N-cadherin、MMP2、Vim、β-canteninmRNA 表达。同时,与 miR-21/Lovo 细胞+空白血清组相比,扶正解毒方含药血清能逆转过表达miR-21导致的E-cadherin、PDCD4 mRNA 表达下调,及 N-cadherin、MMP2、Vim、β-canteninmRNA 表达上调,P<0.05,均具有统计学意义;6、扶正解毒方含药血清可促进Lovo细胞总蛋白中E-cadherin表达,随着含药血清剂量的升高,促进作用明显增强。扶正解毒方含药血清能抑制Lovo细胞总蛋白中N-cadherin表达,抑制效果随浓度增加而增强。扶正解毒方含药血清可促进Lovo细胞总蛋白中PDCD4表达,抑制β-cantenin、c-Jun表达;7、扶正解毒方对人结肠癌裸鼠皮下移植瘤的抑制结果显示扶正解毒方对裸鼠成瘤有一定抑制作用;8、与空白对照组相比,中药组皮下移植瘤组织切片中E-cadherin、PDCD4表达增加、Vimentin、β-cantenin 表达减少;9、扶正解毒方可显著上调结肠癌裸鼠移植瘤中PDCD4、E-cadherin蛋白的表达,降低肿瘤组织内c-Jun、Vimentin、N-cadherin蛋白的表达(P<0.05),也可降低β-cantenin蛋白的表达,但不具有显著性。结论:1、扶正解毒方在体内外均能抑制人高转移结肠癌Lovo细胞增殖;2、扶正解毒方含药血清能有效抑制Lovo细胞侵袭、转移能力,可能与影响EMT进程相关;3、扶正解毒方含药血清可上调E-cadherin、PDCD4蛋白表达,下调N-cadherin、β-cantenin、c-Jun的蛋白表达,呈剂量依赖,高剂量组含药血清效果最显著;4、扶正解毒方含药血清可抑制Lovo细胞N-cadherin、Vimentin、MMP2、β-cantenin mRNA 的表达,促进 E-cadherin、PDCD4 mRNA 的表达;5、扶正解毒方可促进人结肠癌裸鼠移植瘤中E-cadherin、PDCD4蛋白的表达,抑制N-cadherin、Vimentin、β-cantenin及c-Jun蛋白的表达,可能影响结肠癌裸鼠移植瘤EMT。