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第一部分MANF表达与抑郁症的相关性研究目的:检测首发抑郁症（DN-MDD）患者和复发抑郁（DT-MDD）患者外周血清中脑星形胶质细胞源性神经营养因子（mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF）的表达水平,并探讨外周血MANF水平作为抑郁症诊断标志物的临床价值。方法:收集住院部首发抑郁症患者和复发抑郁症患者以及体检健康对照组的血清。采用酶联免疫吸附方法检测血清MANF水平,比较抑郁患者和健康对照间血清MANF表达差异。统计分析血清MANF表达与MDD的相关性。结果:（1）DN-MDD患者与年龄性别相匹配的健康对照者的相比,外周血清的MANF表达水平显著降低。DT-MDD患者的外周血清MANF水平较DN-MDD患者明显提升。（2）Pearson相关性分析显示,DNMDD患者中MANF水平与HAMD评分呈负相关（相关系数r=-0.414,P=0.007）。（3）受试者工作特征曲线（ROC）的分析结果显示,DNMDD患者血清MANF表达水平在曲线下的面积（AUC）为0.955,DT-MDD患者血清MANF表达水平在曲线下的面积（AUC）为0.782。结论:外周血清MANF表达水平与抑郁症有关。DN-MDD患者血清MANF水平表达降低,而DT-MDD患者的较前者升高,表明抗抑郁治疗后会改变血清MANF水平。血清MANF表达可能是一个潜在的诊断DN-MDD的生物标志物。第二部分MANF在小鼠抑郁模型中的作用和机制研究目的:检测MANF在小鼠抑郁模型中的表达水平,验证小鼠抑郁模型MANF表达水平的改变对抑郁样行为的影响,并进一步探讨MANF在抑郁症中的作用机制。方法:（1）构建慢性社会挫败应激（CSDS）和慢性束缚应激（CRS）两种慢性应激抑郁小鼠模型,通过Western Bot和实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-q PCR）检测海马和前额叶脑区的MANF蛋白和m RNA表达,并通过Western Blot检测内质网应激（ERS）相关蛋白的表达。（2）通过海马立体定位注射MANF过表达腺相关病毒（AAV-Manf）,将小鼠暴露于CSDS或CRS诱导抑郁样行为,观察过表达MANF对抑郁样行为的影响。（3）通过海马立体定位注射MANF干扰腺相关病毒（AAV-sh Manf）,观察敲低MANF表达是否影响小鼠行为;并叠加阈下社会挫败应激（SSDS）后,进一步观察敲低MANF对小鼠抑郁样行为的影响。（4）通过Western Blot方法检测海马ERS和炎症反应相关蛋白的变化情况,利用RT-q PCR检测炎性细胞因子m RNA水平表达。结果:(1行为学测试显示,CSDS敏感小鼠社会交互比值降低、糖水偏好程度下降、TST的静止时间增加,同时OFT中的自发活动和探索行为减少;CRS模型小鼠的糖水偏好程度下降、TST和FST的静止时间增加。（2）Western Blot检测和RT-q PCR检测发现,CSDS敏感小鼠和CRS小鼠海马MANF蛋白和m RNA表达升高,进一步检测发现前额叶MANF也会升高,同时海马和前额叶的ERS标志蛋白GRP78和CHOP蛋白表达水平升高。（3）AAV病毒过表达海马MANF升高MANF表达水平,逆转了CSDS和CRS诱导的小鼠糖水偏好程度降低、TST和FST的不动时间增加以及OFT中的自发活动和探索行为减少,同时也提升了CSDS诱导的小鼠社会交互比值的下降,提示过表达MANF抑制小鼠抑郁样行为。（4）AAV病毒过表达海马MANF显著抑制CSDS和CRS诱导的小鼠海马ERS激活蛋白GRRP78、GRP94的表达增加,及抑制PERK/ATF4/CHOP信号通路的激活;同时过表达MANF显著抑制CSDS和CRS诱导小鼠海马炎性细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）m RNA表达水平的增加,以及降低TLR4/My D88/NF-κB炎症通路相关蛋白的表达。（5）AAV病毒沉默海马MANF降低MANF表达水平,抑郁相关行为学检测显示,沉默MANF表达显著提升TST的不动时间,但对其他行为学的改变无显著性差异。进一步叠加SSDS阈下应激,发现其能提升小鼠对应激的易感性,降低社会交互比值与糖水偏好率,提升TST中的不动时间,以及显著降低OFT中的自发活动和探索行为。（6）AAV病毒沉默海马MANF后给予SSDS应激,提升MANF、GRP78、GRP94及PERK/ATF4/CHOP信号通路蛋白水平,诱导TLR4/My D88/NF-κB炎症通路相关蛋白表达升高,同时也导致海马炎性细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）m RNA表达水平的增加。结论:MANF表达及ERS与抑郁症相关。过表达海马MANF表达改善小鼠抑郁样行为,抑制ERS以及炎症反应;相反,沉默海马MANF表达增加小鼠对应激易感性并诱导产生抑郁样行为,导致ERS及炎症反应发生。提示MANF可能通过调控ERS和炎症反应来影响抑郁症的发生发展。第三部分MANF在LPS和TM诱导小胶质细胞体外模型中的机制研究目的:构建体外小胶质细胞ERS及炎症模型,探讨MANF通过ERS及炎症反应在小胶质细胞中的作用。方法:（1）采用LPS处理诱导BV2小胶质细胞炎症模型,采用ERS诱导剂衣霉素（TM）处理诱导BV2细胞ERS模型。（2）通过重组MANF蛋白（rh MANF）处理提升MANF表达,观察rh MANF对LPS和TM诱导的BV2细胞损伤的影响。（3）应用慢病毒转染干扰MANF表达,观察沉默MANF表达后对BV2细胞ERS及炎症反应的影响。（4）通过Western Blot方法检测海马ERS和炎症反应相关蛋白的变化情况,利用RT-q PCR检测炎性细胞因子m RNA水平表达。结果:（1）离体水平上,LPS和TM处理能诱导BV2小胶质细胞MANF蛋白表达升高,同时也提升ERS标志蛋白GRP78和CHOP表达。（2）重组MANF显著恢复LPS和TM诱导BV2细胞ERS激活蛋白GRRP78、GRP94的表达水平,及抑制PERK/ATF4/CHOP信号通路的激活。（3）重组MANF显著降低LPS和TM诱导BV2细胞TLR4/My D88/NF-κB炎症通路相关蛋白的表达,同时明显降低炎性细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）m RNA表达水平的增加。（4）RT-q PCR方法检测表明,慢病毒MANF干扰病毒明显降低BV2细胞MANF基因表达。（5）离体水平上,沉默MANF表达增加BV2细胞GRP78、GRP94及PERK/ATF4/CHOP信号通路蛋白水平,诱导TLR4/My D88/NF-κB信号通路激活,同时沉默MANF表达导致BV2细胞炎性细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）m RNA表达水平的增加。结论:重组MANF能够改善LPS和TM诱导BV2小胶质细胞的ERS和炎症反应,而沉默MANF表达会诱导BV2细胞发生ERS和炎症反应,提示MANF通过调控ERS和炎症反应影响小胶质细胞的活化。