口蹄疫（foot-and-mouth disease, FMD）是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)引起的偶蹄类动物烈性传染病，被国际兽疫局（Office International des Epizooties, OIE）列为A类传染病之首。疫苗接种是防治FMD爆发的主要措施之一，而要控制FMD流行，首先要将病毒感染动物从疫苗接种群体中区分开来。本文分为两部分，第一部分为：FMD鉴别诊断抗原3ABC的原核表达与纯化；第二部分为：RNAi抑制FMDV复制的初步研究。第一部分在大肠杆菌表达并纯化FMDV非结构蛋白3ABC，旨在为研制FMDV感染和疫苗接种鉴别诊断试剂盒奠定基础。为构建表达载体，扩增了O型FMDV 3ABC片段，插入到原核表达载体pQE30Xa，利用PCR、双酶切和测序进行鉴定，成功构建了重组载体pQE3ABC；转化到M15(pREP4)和SG13009(pREP4)宿主菌中表达，表达产物经SDS-PAGE分析，大小为40kD左右，经Western-blot检测证明该融合蛋白可以与标准抗O型口蹄疫抗体发生特异性反应。优化了重组质粒pQE3ABC的表达条件，其结果为：氨苄青霉素和IPTG的适宜浓度分别为100μg/mL和1mM，在M15(pREP4)和SG13009(pREP4)两个宿主菌内表达差异不显著。利用镍离子亲和层析柱进行融合蛋白纯化，SDS-PAGE结果表明纯化产物较为单一。利用稀释复性法（超滤）对纯化的融合蛋白进行复性，并利用BCA-蛋白质定量测定试剂盒测得复性后的融合蛋白浓度为80-100μg/mL。本文第二部分为：利用RNAi抑制FMDV在BHK细胞中复制的初步研究，旨在为利用RNAi防治FMD做一些尝试。FMDV基因组为单股正链RNA，既可作为基因组复制的模板，又可作为mRNA进行蛋白质翻译，因而很适合于RNAi抗病毒的研究。根据FMDV IRES和L串联序列两侧的保守区域设计了两个引物，利用RT-PCR和PCR方法扩增出该串联序列，并进行测序。测序结果表明：IRES非常保守，未出现碱基差异；而L基因则出现了7个碱基突变。在测序的基础上，选择FMDV的毒力因子L作为靶基因，筛选位于启始密码子下游第229nt后21nt长的序列为靶位点，在体外利用PCR方法合成了siRNA表达盒（SEC）。细胞单层长成50-70%时，用脂质体将纯化的SEC-L229转染到BHK细胞中，转染4h后用FMDV接种细胞，24h后用间接免疫荧光方法检测口蹄疫病毒在BHK细胞中的复制情况。研究结果表明：SEC-L229以序列特异性方式极大地抑制了口蹄疫病毒在BHK细胞中的复制（>80%），并降低了BHK细胞的死亡率。25ng和50ng SEC-L229处理组间对病毒复制的抑制作用差异（剂量依赖性）不显著。本研究初步表明，利用PCR方法合成SEC快速、经济，SEC可特异性地抑制BHK细胞中FMDV的复制，RNAi技术可能为防治口蹄疫提供一个新的途径。