论文部分内容阅读
目的：白血病是最为常见的血液系统恶性肿瘤之一，其中急性髓系白血病(AcuteMyeloid Leukemia，AML)约占所有白血病的59％，其发病机理尚不十分清楚。目前的研究表明基因突变和蛋白质的异常表达在白血病发病过程中扮演重要角色。NPM1基因突变在急性髓系白血病中占25～30％，目前发现NPM1突变在造血细胞的恶性转化中发挥着重要的作用。先前的研究表明，NPM1突变(NPMc+)基因的白血病细胞具有特殊的基因表达特征，如HOX家族基因、MEIS1基因在突变系统中显著高表达，这些基因不仅是引发白血病的关键调节子，而且是MLL融合蛋白的下游靶点。在携带有MLL融合蛋白的AML中，MLL的融合伴侣可以募集DOT1L，对MLL靶基因的H3K79位点进行甲基化，造成这些基因过度活化。然而NPM1突变是否能够影响组蛋白H3K79甲基化水平还不是很清楚。 方法：⑴在急性髓系白血病细胞系中，利用质粒构建、脂质体转染、RNA干扰及Westernblot技术，检测H3K79me1/me2/me3的水平。⑵繁育NPM1突变转基因小鼠，收集了NPM1突变小鼠的骨髓细胞，分选出Lin-S-ca1+C-kit+(LSK)的造血干祖细胞，利用Westernblot、免疫荧光、流式等技术检测H3K79甲基化水平，并与正常小鼠相对应的骨髓细胞比较。⑶用H3K79甲基化酶DOT1L抑制剂EPZ004777和EPZ5676药物分别处理白血病细胞系和转基因小鼠的骨髓细胞，研究DOT1L抑制剂促进NPM1突变细胞凋亡的作用。⑷联合DOT1L抑制剂和全反式维甲酸(ATRA)用药，研究其对NPM1突变的AML的影响。 结果：①NPM1基因突变的AML细胞中组蛋白H3K79的甲基化水平增高。②NPM1基因突变可以引起组蛋白H3K79甲基化程度和DOT1L蛋白水平的升高。③DOT1L抑制剂EPZ004777和EPZ5566可以抑制DOLT1蛋白表达和降低H3K79甲基化水平，从而抑制细胞NPM1突变细胞增殖和促进其凋亡。④DOT1L抑制剂联合ATRA可以进一步降低H3K79甲基化水平，促进NPM1突变细胞的凋亡。 结论：NPM1基因突变可以引起组蛋白H3K79甲基化水平的提高，而DOT1L抑制剂可以降低组蛋白H3K79甲基化，抑制NPM1基因突变的急性髓系白血病细胞的增殖，促进细胞的凋亡，是NPM1突变的急性髓系白血病的潜在治疗药物。