脑血管病是导致人类死亡的常见疾病之一,其中缺血性中风的病死率和致残率高,严重威胁人类健康,影响患者生活质量。但当前对于该疾病的治疗仍无突破性进展,特别是对中风恢复期的治疗仍然是临床上棘手问题之一。本课题组认为,中风属于“络病”范畴,其核心病机为“毒损脑络”。解毒通络复方正是以这一创新性病机理论假说为指导,在结合缺血性中风现代病理生理学和中药生物效应以及国内外最新研究成果的基础上,研制出的由中药栀子、丹参、黄芪、天麻的有效组分配伍而成的中药新配方。基于此,本实验旨在研究缺血性脑损伤后突触再生的机制,以及解毒通络复方对其的影响,探讨中医药在解毒通络、调和营卫、凉血解毒、和血通络等综合功效下,有效地实现对脑缺血炎症级联反应病理过程的阻断作用,改善大脑微环境,诱导神经突触的结构和功能再建,发挥其对神经元保护作用的机制,为研究中医药治疗缺血性脑血管病的作用途径与靶点提供有意义的思路。目的：本研究从突触结构以及突触生长微环境变化两方面来研究缺血性脑损伤后突触再生的机制及解毒通络复方对其的影响。1验证解毒通络复方对大鼠缺血性脑损伤后神经功能及形态的影响2观察解毒通络复方对大鼠缺血性脑损伤后突触结构的影响3观察解毒通络复方对大鼠缺血性脑损伤后突触生长微环境中的活性因子的影响方法：1.应用步态分析和神经功能功能评分观察神经功能恢复的情况。2.应用HE染色法光镜下观察脑组织一般形态。3.应用镀银染色、透射电镜的方法来观察神经突触一般和超微结构的变化。4.应用免疫组织化学法观察突触素、肌动蛋白的表达,来揭示大鼠脑缺血损伤后突触再生的情况。5.应用酶联免疫(ELISA)法和免疫组织化学法观察突触生长微环境中生物活性因子脑源性神经生长因子(BDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量和表达变化。结果：1.在步态分析结果显示,解毒通络复方组与模型组相比明显增大,有显著的差异。神经功能功能评分结果显示,解毒通络复方组与模型组相比的评分明显降低,具有明显差异。以上结果初步验证了：解毒通络复方对缺血后受损后神经功能的恢复起到了一定的促进作用。2.HE染色光镜下观察结果：可见大鼠缺血性脑损伤4周和8周时,皮层顶叶区神经元大量丢失,皮层区神经元和星形胶质细胞出现明显病理变化,给予解毒通络复方后梗死灶面积与模型组相比明显减小。神经元和星形胶质细胞损伤程度均有所减轻。3.镀银染色观察结果：正常组神经元形态结构完整,分布密集,树突数量多,轴突长。各个突触间连接紧密。可见轴突-树突式突触、轴突-胞体式突触等突触类型。模型组神经元坏死严重,数量明显减少。残存神经元突触数量少。与模型组相比,解毒通络复方组神经元数量增多,形态结构基本完整,突触数量增多,有见部分突触间相互连接。电镜观察结果：正常组神经元突触较密集,结构清晰,可见突触前膜、突触后膜、突触间隙以及突触前部囊泡等。突触后致密区染色深,密度大。模型组神经元突触数量明显减少,突触前、后膜结构模糊不清,突触后致密区密度低。与模型组相比,解毒通络复方组神经元突触数量增加,可见新生的穿孔突触,突触前膜、突触后膜以及突触前囊泡清晰可见,突触后致密区密度大。4.用免疫组化法观察大鼠局灶性脑缺血性损伤后脑组织皮质区突触素SYN的表达,结果显示：模型4周组SYN的表达与正常组相比明显降低,有显著性差异(P<0.01)。解毒通络复方4周组与模型组相比明显增高,有显著性差异(P<0.001)。模型8周组SYN的表达与正常组相比有明显降低,具有显著性差异(P>0.001)。解毒通络复方8周组与模型组相比SYN的表达呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05)。免疫组化法观察大鼠局灶性脑缺血性损伤后脑组织皮质区肌动蛋白ACTIN的表达,结果显示：模型4周组ACTIN的表达与正常组相比略有降低。解毒通络复方4周组与模型组相比有升高趋势。模型8周组ACTIN的表达与正常组相比有明显降低,具有极显著性差异(P<0.001)。解毒通络复方8周组与模型组相比显著增高,有极显著性差异(P<0.001)。初步验证了：解毒通络复方在对大鼠脑缺血性损伤后神经元和突触的再生方面有一定的促进作用。5.通过酶联免疫(ELISA)法和免疫组织化学法观察突触生长微环境中生物活性因子脑源性神经生长因子(BDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量和表达变化。结果显示：用ELISA法检测大鼠局灶性脑缺血性损伤后各组血清和患侧(左侧)脑匀浆中BDNF、VEGF、BFGF含量1) BDNF模型4周组组与正常组相比降低。解毒通络复方8周组与模型组有明显升高趋势,但无显著性差异。,模型8周组与正常组相比明显降低,有显著性差异(P<0.05)。解毒通络复方8周组与模型组相比明显增高。有显著性差异(P<0.05).2) BFGF模型4周组与正常组相比明显增高,有极显著性差异(P<0.001)。解毒通络复方4周组与模型组相比明显降低。有极显著性差异(P<0.001)。模型8周组与正常组相比明显增高,有极显著性差异(P<0.001)。解毒通络复方8周组与模型组相比明显降低。有极显著性差异(P<0.001)。3) VEGF模型4周组与正常组相比明显增高,有显著性差异(P<0.01)。解毒通络复方4周组与模型组相比明显降低,有显著性差异(血清中P<0.01)、(脑匀浆中P<0.05)。模型8周组与正常组相比明显增高,有极显著性差异(血清中P<0.001)、(脑匀浆中P<0.05)。解毒通络复方8周组与模型组相比明显降低,有极显著性差异(血清中P<0.01)、(脑匀浆中P<0.001)。免疫组化结果与ELISA结果基本呈一致性。初步验证了：解毒通络复方可能是通过调节突触生长微环境中的活性因子的变化来促进突触再生,进而达到神经保护和神经功能恢复的目的。结论：1.大鼠脑缺血性损伤后神经元明显受损,解毒通络复方对缺血后损伤神经功能的恢复起到了一定的促进作用。2解毒通络复方在对大鼠脑缺血性损伤后神经元和突触的再生方面有一定的促进作用。3.解毒通络复方可能是通过调节突触生长微环境中的活性因子的变化来促进突触再生,进而达到神经保护和神经功能恢复的目的。